Skip to content

Autoodporność specyficzna względem narządu u myszy, których repertuar komórek T jest kształtowany przez pojedynczy antygenowy peptyd cd

3 miesiące ago

817 words

Komórki te hodowano za pomocą napromieniowanych komórek śledziony B2H TKO w obecności 10% suplementu hodowli T-STIM bez ConA (Collaborative Biomedical Products, Bedford, Massachusetts, USA). Po trzech lub czterech rundach stymulacji, komórki zdolne do życia (1 x 105 / studzienkę) odzyskane za pomocą Lympholyte-M (Cedarlane Laboratories Ltd., Hornby, Ontario, Canada) hodowano z napromieniowanymi komórkami śledziony (1 x 106 / studzienkę) z B2H TKO myszy lub myszy TKO przez 80 godzin w obecności lub nieobecności YAe przy 20 ug / ml. Podczas ostatnich 16 godzin hodowli dodano .l [3H] tymidyny i zmierzono włączoną radioaktywność. W niektórych eksperymentach wytwarzanie IL-2, IL-4 lub IFN-a zmierzono przy użyciu systemu Biotrak ELISA (Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, Wielka Brytania). Chimery szpiku kostnego i transfer adopcyjny. Po wyeliminowaniu dojrzałych komórek T i B, komórki szpiku kostnego przygotowane z myszy TKO H0 TKO lub B2L przeniesiono do napromienionych (850 cGy) myszy B2L TKO, H3 TKO lub TKO (1 x 107 komórek / mysz biorca). W niektórych doświadczeniach, komórki obwodowych węzłów chłonnych CD4 + (5 8 x 106) od dotkniętych myszy TKO H3 stymulowano komórkami śledziony B2H TKO w obecności mAb anty-CD3 (1 .g / ml) i 10% T-STIM suplementy hodowlane bez ConA i przeniesione do myszy biorcy w momencie rekonstytucji. Ab administracji. Jeden miligram YAe lub dopasowany pod względem izotypów Ab BB7.2, swoisty dla HLA-A2, podawano dootrzewnowo myszom H3 TKO lub B2H TKO co 3. 4 dni, rozpoczynając, gdy myszy miały 7 tygodni. Nerwy kulszowe przygotowano z myszy H3 TKO w wieku 16 tygodni i analizowano pod kątem infiltracji makrofagów CDllb +. W przypadku myszy B2H TKO, odsetek śledzionowych limfocytów B lub komórek dendrytycznych eksprymujących kompleks I-Ab3E2- 52-68 analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Wyniki W trakcie hodowli okazało się, że myszy H3 TKO wykazywały dysfunkcję kończyn tylnych. W wieku 10 tygodni lub później wykazywały atonię lub ściskanie kończyn tylnych po uniesieniu ogona, a dysfunkcja postępowała stopniowo, z wyraźną atrofią mięśni. Trzydzieści trzy z pięćdziesięciu myszy H3 TKO (66%) rozwinęło dysfunkcje kończyn tylnych i zanik mięśni w wieku 20 tygodni. Nie stwierdzono istotnej różnicy w częstości występowania u mężczyzn i kobiet (odpowiednio 71,0% i 57,9%). Przeciwnie, tych objawów klinicznych nie obserwowano u myszy TKO B2L lub myszy TKO. Aby zwizualizować patologiczne procesy leżące u podstaw klinicznych objawów choroby, przeprowadziliśmy analizę histologiczną. Każdy mięsień tylnej kończyny od myszy H3 TKO dotkniętych chorobą wykazywał mniej niż 60% masy nietransgenicznych miotów. Połączenia nerwowo-mięśniowe nie wykazały zauważalnych nieprawidłowości w histologii (dane nie przedstawione). Jednakże, podczas gdy zwarte mielinizowane aksony były obserwowane w nerwach kulszowych myszy TKO i B2L TKO (Figura 1, aib), nerwy kulszowe od dotkniętych myszy H3 TKO wykazywały demielinizację i zwyrodnienie aksonów z masywnym naciekaniem komórek, szczególnie wokół naczyń krwionośnych. (Figura 1c). Stało się to bardziej widoczne w analizie mikroskopowej elektronowej, która wykazała, że zdegenerowana mielina była fagocytowana przez komórki makrofagopodobne bogate w organelle, wokół których gromadziły się komórki limfoidalne (ryc. 1d). Analiza immunohistochemiczna wykazała, że komórki infiltrujące nerw kulszowy dotkniętych myszy H3 TKO ulegały ekspresji zarówno CD4, CD11b, jak i NK1.1 (Figura 1, e i f). Podczas gdy komórki infiltrujące CD4 + również ulegały ekspresji. TCR (Figura 1g), komórki te nie były wybarwione mAb specyficznym względem NK1.1 (Figura 1h). Komórki wyrażające CD8, TCR lub CD45R były słabo wykrywane wśród komórek infiltrujących (dane nie pokazane). Podsumowując, wyniki te wskazują, że nerwy kulszowe są infiltrowane głównie przez CD4 +. TCR + komórki T i makrofagi. Figura 1Histopatologia obwodowego układu nerwowego u dotkniętych myszy TKO H3. (a (c) Nerwy kulszowe z TKO (a), B2L TKO (b) i myszy H3 TKO dotknięte chorobą (c) zabarwiono błękitem toluidyny. (d) Mikrografia elektronowa tego samego nerwu kulszowego TKO H3, pokazana w punkcie c, pokazująca akumulację komórek limfoidalnych (grotów strzałek) wokół makrofagów zawierających zdegenerowane osłonki mielinowe w obrębie fagosomów (strzałki). (e. h) Podwójna histochemia immunofluorescencyjna nerwu kulszowego od myszy H3 TKO dotkniętej wirusem wykazuje naciek wielu komórek CDllb + (e i f, zielony) i komórek CD4 + (e, czerwony) oraz małe liczby komórek NK1.1 + ( f, czerwony). Immunoreaktywność dla CD4 (g i h, zielony) jest kolokalizowana z tym dla TCR (g, czerwony), ale nie z tym dla NK1.1 (h, czerwony). (i. m) Obecność lub nieobecność CD11b + makrofagów (zielony) i limfocytów T CD4 + (czerwony) w nerwach twarzowych (i), nerwu trójdzielnego (j), nerwu błędnego (k) i nerwach wzrokowych (l) oraz w rdzeniu kręgowym przewód (SC) i grzbietowe (DR) i brzuszne (VR) korzenie nerwu rdzeniowego (m) dotkniętych myszy TKO H3
[przypisy: kotlety mielone bez jajka, młody jęczmień green ways, chomik syryjski ile żyje ]
[patrz też: fitmed, fit med, chomik syryjski ile żyje ]