Skip to content

Dowód, że białko-5 wiążące IGF działa jako czynnik wzrostu ad 5

2 miesiące ago

207 words

W związku z tym przetestowaliśmy działanie IGFBP-5 w obecności IGFBP-4, co wyeliminowałoby działanie IGF-II, o ile którykolwiek byłby wytwarzany przez osteoblasty pochodzące od myszy z IGO-I KO. Wiadomo, że IGFBP-4 wiąże IGF-II z dziesięciokrotnie większym powinowactwem niż z receptorami IGF, a tym samym blokuje wiązanie liganda IGF z jego receptorem (7). Figura 3 pokazuje, że indukowany przez IGFBP-5 (3 wzrost proliferacji osteoblastów pochodzących od myszy z IGO-I KO nie był zależny od dodania IGFBP-4 w dawce 300 ng / ml. Przeciwnie, IGF-I w ilości 10 ng / ml indukuje wzrost proliferacji osteoblastów pochodzących od myszy IGO-KO, który został całkowicie zablokowany przez dodanie IGFBP-4 w identycznych warunkach hodowli. Rysunek 3 Wpływ IGFBP-4 na IGFBP-5. lub indukowaną przez IGF-Ip proliferację komórek osteoblastów pochodzących od myszy z KO IGF-I. Osteoblasty z myszy IGO-I KO (komórki klonu 1) wysiewano jak opisano na Fig. 2. IGFBP-4 (300 ng / ml) lub nośnik dodano przez godzinę przed dodaniem IGFBP-5 (50 ng / ml) lub IGF-I (10 ng / ml) lub DMEM / BSA. Czterdzieści osiem godzin po dodaniu efektorów, proliferację komórek określono za pomocą testu alamarBlue. Jednostki fluorescencji przy 590 nm w hodowli kontrolnej traktowanej BSA wynosiły 347. 10 (średnia . SEM; n = 8). Wartości są średnie. SEM (n = 8). AP <0,05 w porównaniu z kontrolą traktowaną BSA. BP <0,01 w porównaniu z kontrolą leczoną BSA. CP <0,01 względem leczenia IGF-I. Na podstawie tych ustaleń i ustaleń, że IGFBP-5 zwiększa tworzenie kości in vivo (23), przewidywaliśmy, że IGFBP-5 może mieć niezależny od IGF-I. Efekt stymulujący na parametry tworzenia kości in vivo. W związku z tym przetestowaliśmy wpływ IGFBP-5 na parametry tworzenia kości in vivo za pomocą lokalnego modelu miażdżycowego wycinania kości. Eksperymenty in vivo Tworzenie kości oceniano przez pomiar produktów komórek osteoblastów, takich jak ALP i osteokalcyna w ekstraktach z kości czaszki. Eksperyment 1. Pojedynczy miejscowy zastrzyk IGFBP-5 do zewnętrznego okostnej kości ciemieniowej zwiększył aktywność ALP o więcej niż 100% w porównaniu z kontrolnymi traktowanymi podłożem, czy aktywność znormalizowano do suchej masy kości (Figura 4) lub do miligramów białko z ekstraktu kostnego (tabela 2). Wielkość stymulacji IGFBP-5 była porównywalna z równomolowymi dawkami IGF-I. Figura 4 Wpływ miejscowego wstrzyknięcia IGFBP-5 lub IGF-I na aktywność ALP w kościach ciemieniowych myszy C3H. Siedem-tygodniowe myszy C3H / HeJ otrzymywały 0. 0,25 nmol IGFBP-5 lub równomolową dawkę IGF-I do zewnętrznego okostnej prawej kości ciemieniowej. Pięć dni później zebrano kości ciemieniowe i określono aktywność ALP w ekstraktach z kości, jak opisano w Metodach. Wartości są średnie. SEM (n = 8). AP <0,01 w porównaniu z kontrolą traktowaną nośnikiem. BP <0,001 w porównaniu z kontrolą traktowaną podłożem. Tabela 2 Aktywność ALP w ekstraktach calvarialnych myszy C3H po miejscowym podaniu IGFBP-5 i / lub Eksperymentu IGF-I 2. W celu określenia najniższej skutecznej dawki IGFBP-5 w celu zwiększenia parametrów tworzenia kości, testowaliśmy IGFBP-5 na 0,002, 0,01 i 0,05 nmol / mysz. Stwierdziliśmy, że IGFBP-5 zwiększa aktywność ALP w sposób zależny od dawki ze 100% wzrostem przy 0,05 nmol (Figura 5, Tabela 2). Przy najniższej badanej dawce (0,002 nmol / mysz), IGFBP-5 zwiększał aktywność ALP, ale IGF-I nie. IGFBP-5 wstrzykiwany razem z IGF-I w tej dawce zwiększał aktywność ALP w takim samym stopniu jak sam IGFBP-5. W wyższych dawkach połączenie równomolowych dawek IGFBP-5 i IGF-I zwiększało aktywność ALP w takim samym stopniu jak sam IGFBP-5 lub IGF-I. Figura 5 Wpływ miejscowego wstrzyknięcia IGFBP-5 i / lub IGF-I na aktywność ALP w kościach ciemieniowych myszy C3H. Siedemtygodniowe myszy C3H / HeJ otrzymały 0. 0,05 nmol IGFBP-5 i / lub równomolową dawkę IGF-I do zewnętrznego okostnej prawej kości ciemieniowej. Pięć dni później zebrano kości ciemieniowe i określono aktywność ALP w ekstraktach z kości, jak opisano w Metodach. Wartości są średnie. SEM (n = 6). AP <0,05 w porównaniu z kontrolą traktowaną nośnikiem. BP <0,01 w porównaniu z kontrolą traktowaną podłożem. CP <0,001 w porównaniu z kontrolą traktowaną podłożem. DP <0,05 w porównaniu z samym 0,002 nmolem IGF-I. Doświadczenie 3. Aby ocenić, czy wywołany przez IGFBP-5 wzrost aktywności ALP in vivo był spowodowany przez mechanizm niezależny od IGF-Ip, przetestowaliśmy działanie IGFBP-5 u myszy IGO IGF-I i ich rodzeństwa z miotu typu dzikiego. Leczenie IGFBP-5 zwiększało aktywność ALP i poziomy osteokalcyny u obu myszy z IGO-I KO i myszy z miotu typu dzikiego o 50. 120%, gdy standaryzowano je na podstawie suchej masy kości (Figura 6). Podobnie, IGF-I również zwiększał aktywność ALP i poziomy osteokalcyny zarówno u myszy IGF-I KO, jak i myszy typu dzikiego. Figura 6 Wpływ miejscowego wstrzyknięcia IGFBP-5 lub IGF-I na aktywność ALP (wypełnione słupki) i poziomy osteokalcyny (otwarte słupki) w kościach ciemieniowych myszy z nokautem IGF-I (IGF-I KO) i ich myszom z miotu typu dzikiego (WT ) [patrz też: przepisy w diecie dukana, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, sennik pocałunek w policzek ] [podobne: sennik pocałunek w policzek, zapalenie woreczka łzowego, glykopeel ]