Skip to content

Dowód, że białko-5 wiążące IGF działa jako czynnik wzrostu cd

2 tygodnie ago

760 words

Dawki IGF-I i IGFBP-5 określono na podstawie wcześniej opublikowanych badań, w których opisano wpływ miejscowego podawania IGF-I na tworzenie kości w kościach ciemieniowych (30). We wszystkich doświadczeniach myszy były pogrupowane według ich wagi. Pod koniec każdego doświadczenia myszy uśmiercano przez wdychanie etanu i dekapitację; calvariae zebrano i przechowywano w temperaturze ~ 70 ° C aż do wykonania pomiarów biochemicznych. Procedury eksperymentalne przeprowadzone w tym badaniu są zgodne z wytycznymi NIH dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych i zatwierdzone przez Podkomisję ds. Badań nad Zwierzętami w Centrum Medycznym Administracji Weteranów Jerry ego L. Pettisa. Eksperyment 1: Lokalny efekt IGFBP-5 lub IGF-I u myszy C3H. W dniu 1, 7-tygodniowe samice myszy C3H / HeJ otrzymały 0, 0,05 lub 0,25 nmol IGFBP-5 lub równomolowe dawki IGF-I (n = 8 zwierząt na grupę). Każda mysz otrzymywała pojedynczą porcję 10. Ll podawaną za pomocą strzykawki Hamiltona (Reno, Nevada, USA) na zewnętrzną okostną prawej kości ciemieniowej (31, 32). Pięć dni później (dzień 6), myszy uśmiercono. Eksperyment 2: Lokalny efekt połączonego IGFBP-5 i IGF-I u myszy C3H. W dniu 1, 7-tygodniowe samice myszy C3H / HeJ otrzymały 0, 0,002, 0,01 lub 0,05 nmol IGFBP-5, i / lub równomolowe dawki IGF-I (n = 6 zwierząt na grupę). Każda mysz otrzymała 10 | jl leczenia podawanego jak w doświadczeniu 1. przed podaniem mieszaniny, IGF-I inkubowano z równomolową dawką IGFBP-5 przez godzinę w temperaturze pokojowej. W dniu 6 myszy zostały poddane eutanazji. Eksperyment 3: Lokalny efekt IGFBP-5 lub IGF-I u myszy z KO IGF-I. W dniu 1, 7-tygodniowego IGF-I. /. myszy i dzikie myszy z miotu otrzymały podłoże (PBS), 0,0125 nmola / g masy ciała IGFBP-5 (0,05 nmol / mysz dla myszy IGF-I (3 / i 0,25 nmola / mysz dla myszy typu dzikiego) lub równomolowe. dawka IGF-I (n = 5 lub 6 zwierząt na grupę). Każda mysz otrzymała 10 .l podawanego leczenia jak w doświadczeniu (patrz wcześniejsza dyskusja). Stosowane w tym doświadczeniu dawki IGFBP-5 i IGF-I wybrano na podstawie wyników z doświadczenia 1. W dniu 6 myszy uśmiercono. Eksperyment 4: Lokalny efekt IGFBP-4 u myszy C3H. W celu porównania lokalnych efektów IGFBP-5 z IGFBP-4, 7-tygodniowe myszy C3H / HeJ otrzymały nośnik, 0,05 nmola IGFBP-4, i / lub równomolową dawkę IGF-I (n = 8 zwierząt na grupę) . Każda mysz otrzymała 10 .l podawanego leczenia jak w doświadczeniu (patrz wcześniejsza dyskusja). Przed podaniem IGF-I inkubowano z równomolową dawką IGFBP-4 przez godzinę w temperaturze pokojowej. W dniu 6 myszy zostały poddane eutanazji. Eksperyment 5: Lokalny efekt IGFBP-4 u myszy KO IGF-I. W dniu 1, 9-tygodniowego IGF-I. /. myszy i dzikie myszy z miotu otrzymały nośnik lub 0,0125 nmola / g masy ciała IGFBP-4 (0,05 nmol / mysz dla myszy IGF-I (3 / i 0,25 nmola / mysz dla myszy typu dzikiego) (n = 6 zwierząt na grupę). ). Każda mysz otrzymała 10 .l podawanego leczenia jak w doświadczeniu (patrz wcześniejsza dyskusja). Dawka IGFBP-4 w tym doświadczeniu była równomolowa względem dawki IGFBP-5 w eksperymencie 3. W dniu 6 myszy uśmiercono. Kolekcja kości. Kości ciemieniowe zostały wycięte z każdej tuszy i ostrożnie oczyszczone z tkanek miękkich, aby nie zniszczyć okostnej. Każdą kość płukano w PBS w 4 ° C przez 24 godziny, a następnie ekstrahowano w 0,01% Triton X-100 w temperaturze 4 ° C przez 72 godziny, jak opisano poprzednio (30). Testy biochemiczne IGR-I i IGF-II RIA. Poziomy IGF-I i IGF-II mierzono za pomocą RIA po oddzieleniu IGFBP od rozdzielenia Bio-Spin przy użyciu Bio-Gel P10 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, California, USA) w obecności 1M kwasu octowego, jak opisano wcześniej. (1). Metoda ta została uprzednio zwalidowana w celu całkowitego oddzielenia IGFBP od IGF w surowicy i innych płynach biologicznych. W teście na IGF-I stosuje się ludzki rekombinowany IGF-I jako standard oraz poliklonalną surowicę znacznikową i króliczą (1). W teście na IGF-II wykorzystuje się ludzki rekombinowany IGF-II jako standard oraz znacznik i mysie mAb (1). Współczynnik zmienności wewnątrz testu i między testami (CV) wynosił mniej niż 10% dla obu tych testów. Czułość IGR IGF-I i IGF-II wynosiła odpowiednio 20 i 50 .g / ml. W celu zwiększenia czułości, kondycjonowane próbki pożywek zatężono 60 x przez szybkie wirowanie próżniowe przed oddzieleniem Bio-Spin. Osteocalcin RIA. Stężenie osteokalcyny oznaczono stosując przeciwciało królika wytworzone przeciwko peptydowi syntetycznemu osteokalcyny myszy, jak opisano poprzednio (33). Czułość testu wynosiła 19 ng / ml. CV śróddzienne i międzyrasowe wyniosły mniej niż 10%. Aktywność ALP. Aktywność ALP komórek i ekstraktów z kości określono w sposób opisany uprzednio (34).
[patrz też: chomik syryjski ile żyje, przepisy w diecie dukana, dieta dukana przepisy faza 1 ]
[więcej w: fit med, chomik syryjski ile żyje, portius krosno godziny otwarcia ]