Skip to content

EGF wzmacnia zastępowanie interneuronów prążkowia wyrażających parwalbuminę po niedokrwieniu ad 5

3 tygodnie ago

44 words

BrdU + neurony prążkowia eksprymujące NeuN wykryto głównie na granicy zmiany niedokrwiennej w przyśrodkowym prążkowiu. W rzeczywistości w przyśrodkowym ciele prążkowym było 13-krotnie więcej komórek BrdU + NeuN + niż w prążkowiu bocznym po 13 tygodniach (P <0,01, dane nie przedstawione). Podobną proporcję zaobserwowano w przypadku neuroblastów DCX + po 5 tygodniach (Figura 2). Ponadto niedokrwienie i podawanie EGF zwiększały bezwzględną liczbę komórek BrdU + NeuN + w czasie (Tabela 1). Stosunek neuronów BrdU + NeuN + do całych komórek BrdU + wzrósł z 1,1% do 3,0% między 5 a 13 tygodniem (Tabela 1), podczas gdy liczba komórek DCX + zmniejszyła się (Figura 2, b i m; Tabela 1). Dystrybucja i pojawianie się dojrzałych neuronów w czasie, wraz ze zmniejszeniem liczby niedojrzałych komórek, sugerowały, że neuroblasty DCX + różnicowały się w dojrzałe neurony NeuN + w prążkowiu niedokrwiennym. Niektóre komórki BrdU + DCX + również mogły umrzeć, co odzwierciedla zmniejszenie liczby komórek BrdU + DCX +, które stały się dodatnie dla NeuN od 5 do 13 tygodnia (Tabela 1). Figura 3. Różnicowanie neuronalne w prążkowiu niedokrwiennym. (a i c) Reprezentatywne mikroskopowe obrazy konfokalne w kolumnach BrdU, DCX i NeuN pokazujące, że neurony znakowane BrdU (groty strzałek) były umiejscowione w strefie granicznej niedokrwiennej zmiany w 5 (a) i 13 (c) tygodniach. Biała linia ciągła nakreśla obszar zmiany. Pasek skali to 50 .m. (b i d) Analiza konfokalna 3D komórek BrdU + DCX + w 5 tygodniu (b) i komórkach BrdU + NeuN + w 13 tygodniu (d) po niedokrwieniu. Rekonstruowane obrazy ortogonalne są przedstawiane jako oglądane z boków zarówno w płaszczyznach xz (góra) i yz (prawo). Groty strzałek wskazują komórki z podwójnymi znakami. Pasek skali to 10 .m. n = 5. 6 na grupę (ilościowo, patrz tabela 1). Tabela Liczba neuronów noworodków w przyśrodkowym prążkowiu w 5 i 13 tygodniu po niedokrwieniu Zastosowanie wbudowania BrdU + jako markera podziału komórki i nowo narodzonych neuronów wymaga ostrożności w uszkodzonym mózgu, ponieważ komórki z uszkodzeniem DNA zawierają również BrdU w procesie naprawy (30 ). Jednak SVZ jest odległa od zmiany niedokrwiennej, a jej komórki prawdopodobnie nie wytrzymają uszkodzenia DNA (31). Co więcej, dwa wyniki sugerują, że wbudowywanie BrdU odzwierciedlało podział komórek progenitorowych w naszych doświadczeniach: (a) nie wykryliśmy barwienia TUNEL w komórkach NeuN + po 9 dniach po niedokrwieniu (dane nie przedstawione) i (b) nie było BrdU + NeuN + podwójnie znakowane komórki w prążkowiu w 9 dni po niedokrwieniu (szczyt liczby komórek BrdU +). Podsumowując, wyniki te potwierdziły, że komórki BrdU + NeuN + nie były uszkodzonymi neuronami, które włączały BrdU jako część procesu naprawy DNA, ale były neuronami prążkowia odróżniającymi się od nowo wytworzonych komórek prekursorowych w 5 i 13 tygodniu po urazie. Fenotypy nowonarodzonych neuronów. Następnie ustaliliśmy, czy nowo narodzone komórki zostały zróżnicowane na określone fenotypy neuronalne. W związku z tym scharakteryzowano neurony BrdU + NeuN + za pomocą immunohistochemii, stosując przeciwciała swoiste wobec PV-, SS- i DARPP-32a. W 13 tygodniu po niedokrwieniu, wykryto liczne komórki prążkowia BrdU + NeuN + eksprymujące PV (Figura 4a) w strefie granicznej zmiany niedokrwiennej (Figura 4e), gdzie wykryto nowe dojrzałe neurony (Figura 3c). W rzeczywistości było ich 345. 69 komórek BrdU + NeuN + PV + w sumie 525. 83 komórki BrdU + NeuN + (Figura 4f, Tabela 1) w przyśrodkowym prążkowiu, co wskazuje, że 65% nowo narodzonych neuronów różnicowało się w interneurony PV +. Pozostałe komórki BrdU + NeuN + nie wyrażały SS ani DARPP-32 (Figura 4e), a ich tożsamość pozostaje nieznana. Podobne wyniki zaobserwowano w prążkowiu bocznym, chociaż ogólna liczba neuronów BrdU-dodatnich była znacznie niższa (dane nie przedstawione). EGF zwiększa zastępowanie neuronów utraconych neuronów PV + 100-krotnie (21%. 4% w porównaniu do 0,2%. 0,5% w przypadku podawania nośnika, Figura 4g), co odpowiada przywróceniu populacji PV + do 60% jej liczby przed uszkodzeniem (Figura 4h). ). Wewnętrzne interneurony PV + normalnie rozszerzają bogatą sieć dendrytów (32). Rzeczywiście, bogata sieć dendrytów PV + została uwidoczniona w uszkodzonym prążkowiu (Figura 4a), co pokazuje, że te nowo powstałe neurony wykazują również cechy morfologiczne aspiny neuronów PV +. Jeśli dendryty z tych nowonarodzonych komórek PV + również kontaktują się ze 100 neuronami projekcyjnymi, podobnie jak normalna komórka, potencjalny wpływ tych wyników na funkcję prążkowia jest imponujący. Ryc. 4. Zastój zastępczy w prążkowiu niedokrwiennym. (a) Rekonstrukcja 3D konfokalna ujawniła nowonarodzone neurony PV + (strzałka) potrójnie znakowane za pomocą BrdU, NeuN i PV w przyśrodkowym prążkowiu u myszy traktowanych EGF w 13 tygodniu po niedokrwieniu. (b. e) Potrójne znakowanie za pomocą BrdU, PV i DARPP-32 ujawniło, że noworodkowe neurony PV + (e, grot strzałki) były zlokalizowane w strefie granicznej niedokrwiennej zmiany chorobowej
[przypisy: leczenie kanałowe białystok, przepisy w diecie dukana, atopowe zapalenie skory zdjecia ]
[hasła pokrewne: podkład match perfection, pocałunek w policzek sennik, fitomed krem nawilżający tradycyjny ]