Skip to content

EGF wzmacnia zastępowanie interneuronów prążkowia wyrażających parwalbuminę po niedokrwieniu ad

2 tygodnie ago

309 words

Dwadzieścia minut później włókno zostało wycofane, a reperfuzja została potwierdzona metodą przepływów laserowo-dopplerowskich. Utrata neuronów była ograniczona do prążkowia ipsilateralnego (Figura 1a). W grupie kontrolnej myszy poddano operacji, ale włókno nylonowe nie zostało wprowadzone do tętnicy szyjnej. Proliferacja z powiększeniem 1EGF po niedokrwieniu. (a) Reperfuzja niedokrwienna spowodowała znaczną utratę neuronów NeuN + (zakreślony obszar) ograniczoną do prążkowia (ST). SVZ, strefa podkomorowa. Pasek skali to 200. M. (b. e) Bez niedokrwienia (b), niewiele komórek Nestin + (zielonych) eksprymujących receptory EGF (czerwone) otaczało komorę boczną (V). Po niedokrwieniu intensywność immunoreaktywności receptora EGF w komórkach nestyny + SVZ (groty strzałek) i liczba komórek nestinowych wyrażających receptor EGF wzrosła po dniu (c), osiągnęła maksimum po 3 dniach (d) i powróciła do poziomów podstawowych po 21 dniach (mi). Linia przerywana wyznacza boczną komorę. Pasek skali to 20. M (n = 3. 4 / punkt czasowy). (f. i) Komórki BrdU + po 9 dniach po pozorowaniu lub niedokrwieniu w obszarze odpowiadającym ramce (a). Po nośniku liczba komórek BrdU + była wyższa po niedokrwieniu (g) niż pozorowana (f) (oznaczanie ilościowe w j). Niedokrwienie, a następnie EGF (IE, 400 ng / dzień) zwiększyło liczbę komórek BrdU + i było większe, gdy infuzja EGF rozpoczęła się 2 dni (h), a nie 21 dni (i) po niedokrwieniu. (f) Pasek skali to 100 .m. Bregma, 0,8 mm. (j) Kwantyfikacja. SV, obsługiwany pozornie; IV, grupa niedokrwienna z podłożem; IE (2d), niedokrwienne grupy z EGF (400 ng / dzień) rozpoczęte w dniu 2; IE (21d), dzień 21 po niedokrwieniu. Porównano wpływ EGF (40 i 400 ng / dobę) w dniu 2. + Znacząca różnica między SV a IV; * pomiędzy grupami niedokrwiennymi traktowanymi nośnikiem i EGF; między grupami leczonymi EGF 2 dni lub 21 dni; § międzyzębowe i boczne prążkowie w obrębie tej samej grupy; n = 3 <4 / grupa, niesparowany test t Studenta, P <0,05. EGF (ludzki rekombinowany EGF, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) rozcieńczono w PBS zawierającym BSA (Sigma-Aldrich) i jednostronnie wprowadzono do komory bocznej za pomocą pompy osmotycznej (1007D, Alza Corp., Mountain View, California, USA) przymocowane do kaniuli (zestaw do infuzji mózgu II, Alza Corp.) wszczepione przy 1,4 mm bocznej i 0,6 mm ogonowej do bregmy na głębokość 1,8 mm od opony twardej. Albuminę dodano jako nośnik na zalecenie producenta EGF i dodano w stężeniu mg / ml, zgodnie z ostatnimi doniesieniami badającymi neurogenezę (7, 8, 19, 20). EGF podawano w infuzji 2 dni po niedokrwieniu przez 7 dni przy szybkości przepływu 0,5 ul / godzinę z początkowym stężeniem wewnątrzotwartego płynu wynoszącym 33 lub 3,3 ug / ml (400 lub 40 ng / d). Zatem albumina była w 3- i 30-krotnym nadmiarze molowym w porównaniu z EGF (400 ng / d) i EGF (40 ng / d), odpowiednio. W innym zestawie doświadczeń, EGF (400 ng / d) podawano wlew przez 21 dni po niedokrwieniu przez 7 dni. W tej grupie, proliferację komórek oceniano w dniu 28 i przeprowadzono test immunohistochemiczny z użyciem doublecortin (DCX) i kwasowej fibrylarnej proteiny glejowej (GFAP) 5 tygodni po zakończeniu wlewu (8 tygodni po niedokrwieniu). Roztwór nośnikowy był jałowym PBS zawierającym mg / ml BSA. Zastrzyki BrdU. Zwierzęta otrzymały iniekcję dootrzewnową BrdU (Sigma-Aldrich, 50 mg / kg, rozpuszczono w jałowym PBS i 0,007 N HCl i przesączono przy 0,22 .m). Dwa razy dziennie wstrzykiwano w dniach 7 i 8 po urazie mózgu. Immunohistochemia. W celu oceny histologicznej zwierzęta poddawano perfuzji przezklatkowej za pomocą 4% paraformaldehydu w PBS w głębokim znieczuleniu. Badania immunohistochemiczne przeprowadzono na swobodnie pływających 40-.m przekrojach wieńcowych, jak podano wcześniej (8, 18). Skrawki wybarwiono stosując następujące przeciwciała i rozcieńczenia: anti-BrdU (1: 400, Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, California, USA), 1: 400; Accurate Chemical & Scientific Corp., Westbury, New York, USA), antygenowy jądrowy antygen (NeuN) (1: 400, Chemicon International, Temecula, Kalifornia, USA), anty-nestin (1: 500; PharMingen, San Diego , Kalifornia, USA), receptor anty-EGF (1: 200, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Kalifornia, USA), anty-DCX (1: 400; Santa Cruz Biotechnology Inc.), anty-Tuj1 (1: 500, Covance Research Products Inc., Berkeley, Kalifornia, USA), anty-GFAP (1: 500, Sigma-Aldrich), przeciw-PV (1: 500, Chemicon International), anty-DARPP-32 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology Inc.), anty-SS (1: 200; Santa Cruz Biotechnology Inc.), biotynylowane anty-mysie IgG (1: 200, Vector Laboratories, Burlingame, California, USA), kompleks perydyny-biotyna-peroksydaza (1 : 200, Vectastain Elite, Vector Laboratories) i wtórne przeciwciała skoniugowane z cy2, cy5 lub rhodamine red-X (1: 400; Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, Pennsylvania, USA) [patrz też: kotlety mielone bez jajka, jak bezpiecznie spędzić wakacje, fit med salon ] [więcej w: zapalenie woreczka łzowego, pomidory suszone przepis, jak bezpiecznie spędzić wakacje ]