Skip to content

EGF wzmacnia zastępowanie interneuronów prążkowia wyrażających parwalbuminę po niedokrwieniu cd

3 tygodnie ago

749 words

Przeciwciała anty-NeuN znakowane cy5 wytworzono zgodnie z procedurą producenta (zestaw do znakowania mAb FluroLink., Amersham International, Amersham, Wielka Brytania). Ujęcie ilościowe. Wszystkie analizy wykonano metodami stereologicznymi. Systematyczne losowe pobieranie próbek co 12 w serii 40-. M przekrojów wieńcowych przygotowywano od każdego zwierzęcia i poddawano obróbce w kierunku immunohistochemii. Prążkowie oceniani w tym badaniu koncentrowali się na regionie z bregma 0,3. 1,3 mm, ponieważ obszar zawału w prążkowiu po stronie zrazowej był stały w obrębie ogniskowanego regionu w naszym badaniu pilotażowym. Zliczanie komórek BrdU + lub PV + przeprowadzono w prążkowiu w trzech sekcjach na zwierzę za pomocą soczewki obiektywu x 40. Prążkowie został podzielony na dwa regiony przez linię środkową jako część przyśrodkową i boczną. Powierzchnie prążkowia na każdej sekcji zmierzono na sąsiednich skrawkach zabarwionych fioletem krezylowym stosując system analizy obrazów MCID Imaging Research (Imaging Research Inc., St. Catherines, Ontario, Kanada). Objętość prążkowia (STV) po niedokrwieniu mierzono w prążkowiu w półkuli w zakresie 0,3. 1,3 mm przez analizę obrazu z zastosowaniem techniki Cavalieri (21). W tym badaniu nie było znaczącej różnicy w STV między grupami leczonymi vehiculum i EGF, chociaż STV zmniejszył się w okresie od 9 dni do 13 tygodni po niedokrwieniu (dane nie przedstawione). Liczbę komórek BrdU + lub PV + w obrębie STV obliczono następnie przez pomnożenie gęstości objętościowej (komórek na milimetr kwadratowy) wyznakowanych komórek przez STV. Liczenie komórek BrdU + koeksprymujących DCX, NeuN lub PV przeprowadzono przy użyciu mikroskopu Nikon TE 400 z laserowym konfokalnym systemem skanującym MRC 1024 (Bio-Rad Laboratories Ltd., Wattford, Wielka Brytania). Dla każdego zwierzęcia liczbę podwójnie znakowanych komórek zliczono w prążkowiu ipsilateralnym, stosując trzy sekcje, jak opisano powyżej. Komórki oznaczono podwójnie znakowanymi, gdy immunoreaktywność BrdU i DCX lub NeuN zachodziła na co najmniej pięć poziomów przez sekcję (krok z, (im). Indeks wymiany neuronalnej (NRI) otrzymano przez określenie stosunku liczby nowo powstałych neuronów obecnych w prążkowiu (komórki BrdU + PV +) i oszacowania liczby martwych neuronów PV +. To ostatnie określono przez oszacowanie liczby komórek PV + w przeciwległym ciele prążkowanym i odjęcie od liczby komórek PV + w prążkowiu niedokrwiennym (z wyłączeniem noworodków komórek PV +). Końcowe równanie wyraża się procentowo według następującego wzoru: NRI = 100 x (liczba komórek BrdU + PV + w prążkowiu ipsilateralnym) / (całkowita liczba komórek PV + w prążkowiu kontralateralnym). [(całkowita liczba ogniw PV + w prążkowiu ipsilateralnym). (liczba komórek BrdU + PV + w prążkowiu ipsilateralnym)] (%). Analizy statystyczne. Wszystkie wartości są wyrażone jako średnia plus lub minus SD. Testy Manna-Whitneya lub niesparowane testy t Studenta w programie StatView 5.0 dla komputerów Macintosh zostały użyte do analizy statystycznej podczas całego badania. Reakcję na dawkę EGF oceniano za pomocą analizy regresji. Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za statystycznie istotne. Do każdego doświadczenia użyto co najmniej pięciu do sześciu zwierząt, o ile nie podano inaczej. Wyniki Wzrost proliferacji EGF po niedokrwieniu. Aby zoptymalizować czas infuzji EGF, zbadaliśmy ekspresję receptora EGF w neuronalnych komórkach progenitorowych w SVZ po 20 min okluzji środkowej tętnicy mózgowej. Neuronalne komórki progenitorowe zdefiniowano jako komórki SVZ eksprymujące nestynę, marker dla multipotencjalnych neuronalnych komórek macierzystych / progenitorowych podczas rozwoju (2, 7). Po ogniskowym niedokrwieniu mózgu ekspresja receptora EGF w komórkach nestyny + SVZ wzrosła już po dniu (Figura 1, b i c), osiągnęła maksymalną ekspresję po 3 dniach (Figura 1d), zmniejszono po 9 dniach (nie pokazano) i zwrócono do poziomów podstawowych po 21 dniach (ryc. 1e). Zbadaliśmy również endogenną ekspresję EGF w prążkowiu w 1, 3 i 7 dniu po uszkodzeniu niedokrwiennym. Pomimo zwiększonej ekspresji receptora EGF w komórkach nestin + nie byliśmy w stanie wykryć znaczących zmian w EGF w homogenatach prążkowia przy użyciu analizy Western blot (dane nie pokazane), co sugeruje, że poziomy endogennego EGF pozostają niskie po urazie (22. 24). W oparciu o dane immunohistochemiczne, rozpoczęliśmy śródkomorowe podawanie EGF w dniu 2 i porównano wpływ 7-dniowej infuzji EGF lub nośnika na proliferację komórek z zastosowaniem inkorporacji BrdU do replikującego DNA (7, 8). Niska dawka EGF (40 ng / dzień) była wystarczająca do zwiększenia liczby komórek BrdU + 11-krotnie w przyśrodkowym ciele prążkowanym, ale nie w prążkowiu bocznym, w porównaniu z niedokrwieniem plus pojazdem (Figura 1j)
[hasła pokrewne: pomidory suszone przepis, kotlety mielone bez jajka, fit med ]
[więcej w: młody jęczmień green ways, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, leczenie kanałowe białystok ]