Skip to content

Elektrofile Triterpenoidów (avicyny) aktywują wrodzoną odpowiedź na stres poprzez regulację redoks baterii genu cd

2 miesiące ago

47 words

Zamrożone skrawki skóry analizowano pod kątem utworzenia 8-hydroksy-2P-deoksyguanozyny (8-OH-dG), jak opisano wcześniej (11). Ocena statystyczna. W celu oceny istotności statystycznej różnicy między grupami kontrolnymi i leczonymi avicyną zastosowano statystyczny lub dwustronny test Studenta. Uważa się, że różnica istotna statystycznie występuje w P <0,05 (12). Wyniki Badania in vitro Regulacja transkrypcji. Nrf2, członek cap. N. rodzina pierścieniowa czynników transkrypcyjnych bZip jest zwykle represjonowana przez swoją lokalizację cytoplazmatyczną poprzez wiązanie z białkiem Keap1 związanym z cytoszkieletem (13). Ekspozycja komórek na induktory enzymów fazy 2 przerywa kompleks Keap1-Nrf2, umożliwiając translokację Nrf2 do jądra, gdzie wiąże się z ARE i aktywuje transkrypcję. Mikroskopia fluorescencyjna komórek Hep G2 transfekowanych pEGFP-Nrf2 ujawniła lokalizację jądra Nrf2 w odpowiedzi na leczenie avicyną D (Figura 1a). Analiza Western blot frakcji jądrowych komórek traktowanych avicyną D3 wykazywała stopniowy wzrost poziomów Nrf2 w czasie, podczas gdy one spadały równocześnie w cytoplazmie (Figura 1b). Zmiany indukowane przez Avicin D. W jądrowym i cytoplazmatycznym poziomie Nrf2 były porównywalne z wywołanymi tert-butylohydrochinonem (t-BHQ), przeciwutleniaczem znanym z indukowania białek fazy 2, takich jak NQO1 przez aktywację ARE (odnośnik 14; Rycina 2a, http://www.jci.org/cgi/content/full/113/1/65/DC1, dla kontroli obciążenia i markerów masy cząsteczkowej). Figura Lokalizacja jądra Nrf2 i aktywacja ekspresji genowej za pośrednictwem ARE. (a) Komórki Hep G2 transfekowane EGFP-Nrf2 były nietraktowane lub traktowane avicyną D (2 .g / ml) przez godzinę w 37 ° C. Lokalizacja jądra Nrf2 była badana za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej (barwienie H & E, x 400). (b) Komórki Hep G2 traktowano avicyną D (2 .g / ml) przez 0-4 godzin w 37 ° C. Analizę Western blot plazmidu cytoplazmatycznego i plazmidu N-LUC oraz aktywność LUC mierzono zgodnie z opisem w Metodach. Reakcję na dawkę aktywującą ARE badano stosując 0. 2 ng / ml avicyny D przez 2 godziny w 37 ° C (c), a kinetykę aktywacji ARE badano stosując 2. G / ml avicyny D przez 0. 16 godzin. w 37 ° C (d). (e) Wpływ DTT (100 .M) na aktywację ARE badano przez zastosowanie DTT do komórek przez 2 godziny, przed, po lub razem z awicyną D (2 .g / ml). ARE, sekwencja regulatorowa działająca w układzie cis, zidentyfikowana w regionach promotorowych kilku genów kodujących enzymy detoksyfikujące w fazie 2, wiąże się z Nrf2 poprzez sekwencję rdzeniową, 5a-TGACNNNGC-3 .. Komórki Hep G2 transfekowane plazmidem hARE-LUC eksponowano na awicynę D, a zmiany aktywności LUC stosowano jako miarę aktywacji ARE. Figura 1c pokazuje zależny od dawki wzrost aktywności LUC kierowanej ARE z 1. 2. G / ml wywoływania maksymalnej aktywacji avicyny D. Avicyna D indukowała również zależny od czasu wzrost aktywności LUC, rozpoczynając od 30 minut po leczeniu, osiągając szczyt po 2 godzinach, a następnie stopniowo zmniejszając się (Figura 1d). Uważa się, że kompleks Keap1-Nrf2 służy jako cytoplazmatyczny czujnik stresu oksydacyjnego (13) w oparciu o obecność wysoce reaktywnych grup sulfhydrylowych w obu tych białkach (13, 15). Aby ocenić rolę reszt cysteinowych w działaniu avicyn, zbadaliśmy wpływ DTT na aktywację ARE wywołaną avicyną D (Figura 1e). Podczas gdy DTT samo w sobie indukowało niewielki wzrost aktywacji ARE, wstępne potraktowanie komórek DTT prawie całkowicie blokowało działanie avicyny D. W przeciwieństwie do tego, DTT podane po leczeniu avicin D miały minimalny efekt, co sugeruje nieodwracalność działania avicyny D .. Inkubowanie avicyny D z DTT przed umieszczeniem jej na komórkach nie miało wpływu na aktywację, co wskazuje, że DTT nie oddziałuje z avicyną D, ale prawdopodobnie konkuruje z nią o wiązanie z cysteinami, które są krytyczne dla aktywacji ARE. Niedawny raport z grupy Talalay zidentyfikował cztery reszty cysteiny, które są kluczowymi czujnikami regulującymi indukcję enzymów fazy 2 w cząsteczce Keap1 (16). To, czy avicyna D wchodzi w interakcję z jedną lub więcej z tych cystein, będzie przedmiotem naszych przyszłych badań. Aktywacja baterii genowej. Po jego wpływ na Nrf2 i ARE, następnie przyjrzeliśmy się działaniu avicin D na baterię dalszych produktów genowych. NQO1, flawoproteina indukowana w odpowiedzi na różnorodne stresy biotyczne i abiotyczne, wykorzystuje NADPH jako donor elektronów do katalizowania redukcji dwuelektronowej i detoksyfikacji chinonów i ich pochodnych. Figura 2a ujawnia zależny od dawki wzrost ekspresji NQO1 w komórkach Hep G2 traktowanych avycyną D przez 2 godziny. Indukcja NQO1 uzyskana przy stężeniu 1. 2. G / ml (0,5. 1. M) awicyny D była porównywalna z osiąganą przy 100. M t-BHQ (2-godzinna terapia) (patrz Suplementowa Figura 2b, http: / /www.jci.org/cgi/content/full/113/1/65/DC1, w przypadku kontroli obciążenia i znaczników masy cząsteczkowej)
[więcej w: portius krosno godziny otwarcia, atopowe zapalenie skory zdjecia, jak bezpiecznie spędzić wakacje ]
[hasła pokrewne: portius krosno godziny otwarcia, odżywki na mase mięśniową, jęczmień green ways ]