Skip to content

Elektrofile Triterpenoidów (avicyny) aktywują wrodzoną odpowiedź na stres poprzez regulację redoks baterii genu czesc 4

2 miesiące ago

749 words

Aby skorelować ekspresję z aktywnością, następnie testowaliśmy pod kątem wrażliwości na dikumarol działanie NQO1 w komórkach Hep G2 traktowanych avicyną D ., stosując dichloroindofenol jako akceptor elektronów. Badanie kinetyki aktywności enzymatycznej wykazało optymalną indukcję aktywności NQO1 pomiędzy 2 a 4 godzinami leczenia za pomocą awicyny D (Figura 2b). Zależne od dawki zwiększenie aktywności NQO1 obserwowano po 2-godzinnym leczeniu avicin D. Wzrost aktywności (2,6-krotny) obserwowany po 2 .g / ml awicyny D (Figura 2c) korelował dobrze ze wzrostem ekspresji (2,7-krotne) obserwowane w podobnych warunkach (rysunek 2a). Rysunek 2 Wpływ awicyny D na enzymy NQO1 i HO-1. (a) Ekspresję NQO-1 badano w komórkach Hep G2 traktowanych 0. 2 | ag / ml awicyny D przez 2 godziny, metodą analizy Western blot. (b i c) Aktywność NQO1 wrażliwą na dikumarol badano w komórkach Hep G2 traktowanych 0. 2 ng / ml avicyny D przez 2 godziny (b) i 2. g / ml awicyny D przez 0. 4 godziny (c ), jak opisano w Methods. Aktywność NQO1 wyrażono w nanomolach dichlorofenolindohenolu (DCPIP) zmniejszonych na minutę na miligram białka. (d) Komórki Hep G2 traktowane avicyną D (2 ug / ml) przez 0. 16 godzin analizowano pod kątem zmian poziomów HO-1 za pomocą analizy Western blot. (e) Komórki Hep G2 traktowane avicyną D (2 ug / ml) przez 0. 24 godziny badano pod kątem poziomów bilirubiny, jak opisano w Metodach. (f) Syntezę ferrytyny badano w komórkach Hep G2 traktowanych avicyną D (2 ug / ml) przez 16. 24 godziny. HO rozkłada hem w równomolowe ilości biliwerdyny, tlenku węgla i żelaza, z których wszystkie mogą być toksyczne. Myszy nie posiadające HO-1 nie są w stanie modulować zapasów żelaza w organizmie i są podatne na uszkodzenie wątroby przez żelazo (17). Aby zbadać wpływ avicyny D na HO-1, najpierw zmierzono ekspresję białka za pomocą analizy Western blot. Znaczący wzrost poziomów HO-1 obserwowano po 8 i 16 godzinach po traktowaniu (Figura 2d) z powrotem do linii podstawowej po 24 godzinach z awicyną D (dane nie przedstawione). Przyczyna opóźnionej indukcji HO-1 (w porównaniu z innymi badanymi enzymami regulowanymi ARE) nie jest jasna. Poza ARE region promotora genu HO-1 zawiera konsensusowe miejsca wiązania dla NF-kB, aktywowanego białka-1, aktywowanego białka-2, elementu odpowiedzi IL-6 i innych czynników transkrypcyjnych (18). Poziomy HO-1 indukowane przez avicynę mogą być zależne od efektu netto niektórych lub większości z tych czynników transkrypcyjnych. Możliwe jest również, że opóźnienie jest na etapie syntezy białka, a nie transkrypcji. Na podstawie niektórych doniesień, że w komórkach stresowych HO-1 jest indukowana po utlenianiu komórkowych tioli, takich jak GSH (19), możliwe jest, że opóźniona indukcja HO-1 w komórkach traktowanych avicin może być drugą fazą ochrony przed stres oksydacyjny. Aby określić, czy zwiększona ekspresja HO-1 spowodowała zwiększoną aktywność enzymatyczną, zbadaliśmy dwa z dalszych produktów aktywności HO-1, mianowicie bilirubinę i ferrytynę. Bilirubina, najobficiej występujący endogenny przeciwutleniacz w tkankach ssaków, zwłaszcza w ludzkiej surowicy, jest silnym zmiataczem rodników ponadtlenkowych i nadtlenowych (20). Dlatego też ekscytujące jest obserwowanie, że leczenie komórek Hep G2 avicin D spowodowało dramatyczny zależny od czasu wzrost poziomu bilirubiny (Figura 2e), który koreluje z uderzającym wzrostem aktywności HO-1. Indukcja bilirubiny może wyjaśniać właściwości przeciwutleniające avicyn w przedziałach lipidowych komórki. Ferrytyna, białko magazynujące żelazo, pochłania wolne żelazo i zapobiega jego udziałowi w generowaniu reaktywnych form tlenu (ROS), a tym samym utrzymuje komórkową homeostazę żelaza. Stres oksydacyjny aktywuje wiele szlaków regulacji ferrytyny (21), z których jeden jest mechanizmem mediowanym ARE (22). Jak pokazano na Fig. 2f, zaobserwowano dwukrotny wzrost syntezy ferrytyny w komórkach Hep G2 po 16-godzinnym traktowaniu avicyną D, co jest zgodne z czasem aktywacji HO-1. Zatem regulacja ferrytyny przez avicyny może przyczynić się do ich działania przeciwzapalnego. Wewnątrzkomórkowy stan redoks jest regulowany przez udział różnych cząsteczek, takich jak TRX, GSH / GSSG) i NADPH. Wysokie stosunki zredukowanych do utlenionych form TRX i GSH są utrzymywane odpowiednio przez aktywność reduktazy TRXred i GSH. Figura 3a pokazuje wpływ avicyny D na aktywność TRX zależną od auranofiny, która wzrasta w ciągu 30 minut leczenia. GSH odgrywa kluczową rolę w regulacji wewnątrzkomórkowego redoks, a także w detoksyfikacji komórek różnych potencjalnie szkodliwych cząsteczek. Działa jako kofaktor dla GPx, enzymu zależnego od selenu, o którym wiadomo, że jest dominującym mechanizmem redukcji H2O2 do wody i nadtlenków lipidów do alkoholu, i znany jest z detoksykacji peroksynitrytu
[więcej w: fit med salon, podkład match perfection, przepisy w diecie dukana ]
[przypisy: kotlety mielone bez jajka, sennik pocałunek w policzek, zapalenie woreczka łzowego ]