Skip to content

FOXP3 jest nowym represorem transkrypcyjnym dla onkogenu SKP2 raka sutka ad 6

2 miesiące ago

253 words

Podczas gdy represję TSA linii komórkowej guza ERBB2hi można uratować przez ektopową ekspresję ERBB2, cel docelowy odpowiedzialny za hamowanie wzrostu komórek guza ERBB2lo pozostał zidentyfikowany. Aby określić znaczenie represji SKP2 w hamowaniu wzrostu przez FOXP3, ektopowo eksprymowaliśmy wektor lub SKP2 do linii komórkowej MCF-7 z indukowalną ekspresją FOXP3 indukowaną przez TetOff. Wpływ ekspresji SKP2 uwidoczniono przez tworzenie kolonii po indukcji FOXP3 przez TetOff. Jak pokazano na Figurze 8, w grupie transfekowanej wektorowo, indukcja TetOff FOXP3 wytarła wszystkie kolonie MCF-7, zgodnie z oczekiwaniami. Co ciekawe, ektopowa ekspresja SKP2 spowodowała prawie całkowite odtworzenie kolonii (Figura 8, dolny panel), chociaż rozmiar kolonii jest nadal nieco mniejszy niż w hodowli bez indukcji FOXP3 (Figura 8, panele górny i środkowy). Wyniki te pokazują kluczową rolę obniżenia poziomu SKP2 w linii komórek raka sutka ERBB2lo. Figura 8 Ekspresja ektopowa Skp2 zasadniczo łagodzi hamowanie wzrostu linii komórkowych MCF-7 przez FOXP3. Linie komórkowe MCF-7 z indukowalną ekspresją GFP (iii, iv) lub FOXP3 (i, ii) transfekowano supertransformowaną kontrolą wektora (i, iii) lub SKP2 (ii, iv). Po usunięciu nietransfekowanych komórek przez selekcję leku, hodowle utrzymywano w warunkach bez tetracykliny przez 2 tygodnie. Górne i środkowe panele pokazują fotografie żywotnych (ii, iii, iv) lub apoptotycznych komórek MCF-7. Oryginalne powiększenie, × 10. Dolny panel pokazuje numery kolonii na płytce 100 mm2. Pod koniec 2 tygodni hodowli, martwe komórki usunięto i płytki zabarwiono fioletowym kryształem. Widoczne kolonie zostały policzone. Przedstawione dane są średnimi SD w trzech powtórzeniach i są reprezentatywne dla 3 niezależnych eksperymentów. ** P <0,001, gdy grupa I i II zostały porównane według testu ucznia. Dyskusja Jako składnik kompleksu SCF E3, SKP2 okazało się ważnym białkiem onkogennym dla kilku głównych typów raka, zwłaszcza raka piersi (5). Nadekspresja SKP2 jest związana ze złym rokowaniem w raku piersi i jest powszechna w przypadku raka, który rozwija się u młodych kobiet (15). Podczas gdy nadekspresję Skp2 opisano w wielu liniach nowotworowych i może ona wywoływać oporność na terapię przeciwnowotworową (5, 15), mechanizmy jej nadekspresji nie zostały dobrze poznane. Tutaj pokazujemy, że Foxp3, który niedawno wykazaliśmy jako pierwszy związany z X gen supresorowy raka piersi, zgodnie z naszą wiedzą, jest, jak wierzymy, nowym regulującym regulatorem ekspresji Skp2. Nasz wniosek opiera się na 4 liniach dowodowych. Po pierwsze, inaktywacja locus Foxp3 spowodowała podniesienie ekspresji Skp2. Komórki nabłonkowe ssaków od myszy heterozygotycznych pod względem mutacji Foxp3 miały 2-krotnie wyższe poziomy Skp2. Ponieważ Foxp3 jest genem sprzężonym z X i jest kompensowany dawką (27), wzrost był prawdopodobnie spowodowany nadekspresją Skp2 wśród komórek, które wyrażały zmutowany allel. Co ważniejsze, spontaniczny rak gruczołu mlekowego, który rozwinął się u zmutowanych myszy Foxp3, które całkowicie unieczynniły locus Foxp3, wykazał drastycznie wyższe poziomy transkryptów Skp2. Jest to dodatkowo potwierdzone przez fakt, że raki sutka obserwowane u myszy WT BALB / c wykazały znacznie mniejszą nadekspresję Skp2. Po drugie, transfekcja Foxp3 do linii komórek raka sutka tłumiła poziomy mRNA Skp2. Używając reportera lucyferazy sterowanego przez promotor Skp2, wykazaliśmy, że Foxp3 znacząco tłumi aktywność promotora. Co więcej, test ChIP wykazał, że Foxp3 wiąże się z określonymi regionami Skp2. Znaczenie miejsc wiążących zostało wykazane przez fakt, że delecja jednego z tych miejsc zniosła represję. Po trzecie, transfekcja Foxp3 spowodowała wzrost p27, głównego celu Skp2. Wzrost p27 był prawdopodobnie ograniczony do fazy G2 / M, ponieważ wysoki odsetek komórek wykazujących ekspresję Foxp3 wykazywał poliploidię, co obserwowano również w hepatocytach myszy z niedoborem Skp2 (8, 9). Wyniki te wskazują, że Foxp3 służy jako ważny regulator progresji cyklu komórkowego. Na koniec wykazaliśmy, że represja SKP2 za pośrednictwem Foxp3 występowała w prawidłowych i złośliwych komórkach nabłonkowych sutka u ludzi. Zatem wyciszanie genu FOXP3 przez siRNA w pierwotnych komórkach nabłonka sutka skutkowało znaczącym wzrostem transkryptu SKP2, podczas gdy indukowana ekspresja FOXP3 w liniach komórkowych raka sutka powodowała zależną od czasu represję ekspresji SKP2. Co ważniejsze, nasza analiza 206 próbek klinicznych wykazała istotnie obniżoną szybkość nadekspresji SKP2 wśród próbek raka sutka FOXP3 + [hasła pokrewne: sennik pocałunek w policzek, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, poliploidalność ] [przypisy: zapalenie woreczka łzowego, glykopeel, poliploidalność ]