Skip to content

FOXP3 jest nowym represorem transkrypcyjnym dla onkogenu SKP2 raka sutka ad

2 miesiące ago

459 words

Ponadto zaobserwowano również powszechną delecję i mutacje somatyczne FOXP3 w próbkach ludzkiego raka sutka. Chociaż zidentyfikowaliśmy FOXP3 jako represor transkrypcyjny onkogenu HER2 / ERBB2 (7), FOXP3 również hamowało wzrost i indukowało śmierć MCF-7 w komórce, linię raka sutka bez nadekspresji HER2 / ERBB2 (7). Dlatego jest prawdopodobne, że Foxp3 może wpływać na inne szlaki związane z rakiem piersi. Biorąc pod uwagę rolę Skp2 w raku piersi (12-15), ustaliliśmy, czy Foxp3 może regulować ekspresję w prawidłowych i złośliwych komórkach nabłonkowych sutka. Tutaj donoszemy, że Foxp3 jest represorem transkrypcji Skp2, onkogenu raka piersi. Dane te wskazują, że defekt FOXP3 jest potencjalnym mechanizmem zwiększania SKP2 w raku piersi i ilustruje intrygującą grę między onkogenami i genami supresorowymi guza w regulacji cyklu komórkowego i karcynogenezie. Wyniki Inaktywacja locus Foxp3 spowodowała zwiększenie ekspresji Skp2. Donoszono, że myszy heterozygotyczne pod względem genu Foxp3 rozwinęły spontaniczny rak piersi z dużą częstością (7). Co więcej, podczas gdy większość transkryptów Foxp3 w normalnych komórkach nabłonkowych pochodziła z alleli WT, wszystkie transkrypty z tkanek rakowych zostały transkrybowane ze zmutowanego allelu. Tak więc w komórkach rakowych locus Foxp3 jest wyciszany. Aby określić, czy Foxp3 tłumi ekspresję Skp2, wybarwiamy prawidłowe i nowotworowe tkanki gruczołu mlekowego przeciwciałami anty-Skp2 i anty-p27. Jak pokazano na Figurze 1A, stwierdzono, że Skp2 jest silnie eksprymowany w komórkach rakowych, ale nie w prawidłowych komórkach nabłonkowych od tej samej myszy. Aby określić ilościowo wzrost transkryptów Skp2, wyizolowaliśmy komórki z zamrożonych sekcji za pomocą mikrodyssekcji laserowej i wyekstrahowaliśmy mRNA do analizy RT-PCR w czasie rzeczywistym. Porównano ekspresję Skp2 w normalnych komórkach nabłonka gruczołu sutkowego z myszy WT lub Foxp3sf / +, jak również z komórek raka sutka od zmutowanych myszy. Jak pokazano na Figurze 1B, w porównaniu z komórkami nabłonkowymi WT, heterozygotyczne komórki nabłonkowe wykazują 2-krotnie wyższe poziomy Skp2, co sugeruje wpływ dawki genowej Foxp3 na poziomy Skp2. Co więcej, w tkance rakowej, która wyciszyła allel WT (7), ekspresja Skp2 została znacznie zwiększona. Figura Naturalnie występująca mutacja w locus Foxp3 skutkuje zwiększoną ekspresją Skp2. (A) Immunohistochemiczne barwienie białka Skp2 w rakach sutka i przyległym normalnym gruczole sutkowym u myszy Foxp3sf / +. Oryginalne powiększenie, × 40. (B) Względne poziomy transkryptów Skp2 w normalnym nabłonku gruczołu sutkowego myszy WT i Foxp3sf / + i tkanki rakowej myszy Foxp3sf / +, jak ujawniono w czasie rzeczywistym RT-PCR próbek LCM. Ekspresja Skp2 została znormalizowana w stosunku do kontroli wewnętrznej, genu Hprt. Przedstawione dane to środki. SD 3 próbek w każdej grupie. Zaobserwowano bardzo istotne różnice pomiędzy tkanką nowotworową a prawidłową (P <0,001, test ANOVA, gdy zastosowano standardy wewnętrzne). Potencjalnym zastrzeżeniem tej interpretacji jest to, że zwiększenie SKP2 może być spowodowane raczej rakiem niż wyciszeniem locus Foxp3. Chociaż myszy WT miały mniejszą częstość występowania i późniejszy początek raka sutka niż heterozygotyczne myszy, pojawił się rak, zarówno spontaniczny, jak i w odpowiedzi na leczenie rakotwórcze (7). Zatem, porównując mysie tkanki raka sutka myszy WT i Foxp3sf / + w celu ekspresji Skp2, można być w stanie dostrzec udział mutacji Foxp3 w porównaniu z nieswoistym efektem wzrostu raka. Jak pokazano w Tabeli 1, 80% spontanicznych raków u myszy WT nie miało nadmiernej ekspresji Skp2. Przeciwnie, miało to 71% spontanicznych guzów myszy Foxp3sf / +. Podobną tendencję zaobserwowano w rakach sutkowych indukowanych rakotwórczością. Tak więc inaktywacja locus Foxp3 prawdopodobnie odpowiada za zwiększoną ekspresję Skp2 w guzach sutka. Tabela Inaktywacja locus Foxp3 przyczyniła się do podniesienia Skp2 w mysich guzach gruczołu sutkowego Foxp3 jako represora transkrypcyjnego Skp2. Ponieważ Foxp3 jest czynnikiem transkrypcyjnym zdolnym do represji lub promowania ekspresji dużej kohorty genów (29, 30), oceniliśmy, czy Skp2 może być bezpośrednim celem Foxp3. Najpierw transfekowaliśmy mysią linię raka sutka, TSA, z białkiem Foxp3 znakowanym V5 i wygenerowaliśmy poliklonalne Foxp3-V5, CL30 i 2 subklony, CL302 i CL305. Korzystając z analizy PCR w czasie rzeczywistym, stwierdziliśmy, że CL302 i 305 mają około 5-krotnie wyższy transkrypt Foxp3 niż CL30. Stwierdzono, że transkrypty Skp2 zmniejszają się o około 10 do 20 razy w linii lub klonach transfektantów Foxp3-V5 w porównaniu z kontrolą wektora [hasła pokrewne: pocałunek w policzek sennik, młody jęczmień green ways, leczenie kanałowe białystok ] [więcej w: pocałunek w policzek sennik, fitomed krem nawilżający tradycyjny, green ways jęczmień ]