Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego ad 5

2 miesiące ago

718 words

W celu ustalenia, czy GPVI jest wymagany do mobilizacji wapnia, mediana akumulacji płytek i mobilizacji wapnia w WT i FcR. /. porównano myszy z niedoborem GPVI. Aktywacja płytek monitorowana przez mobilizację wapnia nie była zależna od GPVI (ryc. 5 i 6). Identyczne wyniki zaobserwowano u myszy WT zubożonych w GPVI przy użyciu przeciwciała monoklonalnego skierowanego przeciwko GPVI (dane nie przedstawione). Rycina 6 Rola trombiny, vWF i GPVI w akumulacji płytek i mobilizacji wapnia. WT, vWF. /. Lub FcR. /. płytki obciążone fura-2 / AM podawano w infuzji myszom biorcy tego samego genotypu. W niektórych doświadczeniach myszy biorcy WT leczono lepirudyną. Tworzenie skrzepliny przeprowadzono jak opisano na Figurze 2, a płytki z płytkami fura-2 (3 obrazowano w celu gromadzenia płytek i mobilizacji wapnia. Reprezentatywne obrazy uzyskano przed urazem (przed) i 30, 60, 90, 120 i 150 sekund po urazie. Trombina jest wymagana do mobilizacji wapnia i gromadzenia się płytek po uszkodzeniu laserem. Wymaganie trombiny do aktywacji płytek prowadzące do mobilizacji wapnia oceniono przez traktowanie myszy WT lepirudyną, inhibitorem trombiny. Wytwarzanie fibryny i akumulację płytek monitorowano w rozwijającym się skrzepie przy użyciu Alexa Fluor 647 skoniugowanej z fragmentami Fab przeciwciał przeciw CD41 i Alexa Fluor 488 skoniugowanych z przeciwciałami swoistymi dla fibryny. Przed wlewem lepirudyny do myszy WT oceniano wiele skrzepów. Po wlewie lepirudyny do żyły szyjnej myszy ponownie wytworzono wiele skrzepów i oznaczono ilościowo fibrynę i akumulację płytek krwi. W tych warunkach wytwarzanie fibryny było całkowicie zablokowane, a gromadzenie się płytek było znacznie osłabione in vivo przez lepirudynę (Figura 7). Mobilizacja wapnia w płytkach WT obciążonych fura-2, wlewana myszom WT uprzednio leczonym lepirudyną, była znacznie zmniejszona, chociaż początkowa faza akumulacji płytek była nadal obecna. Mobilizacja wapnia na płytkę u myszy WT leczonych lepirudyną była znacznie zmniejszona w porównaniu z myszami nietraktowanymi vWFa / p, FcRa / y i WT (Figura 5B). Wyniki te wskazują, że w tym modelu in vivo zakrzepicy w warunkach stosowanych do uszkodzenia laserem aktywacja płytek jest niezależna od vWF, ale zależy od aktywności trombiny. Figura 7 Wpływ lepirudyny na gromadzenie się płytek i odkładanie fibryny u myszy WT. Tworzenie skrzepliny indukowano jak opisano na Figurze 1, a płytki i fibrynę wykryto, stosując odpowiednio fragmenty Fab przeciwciał przeciwko CD41 i przeciwciałom swoistym dla fibryny. Mediana zintegrowanej fluorescencji w czasie jest przedstawiona dla 30 skrzepów generowanych u myszy 3 WT. Po wytworzeniu serii 10 zakrzepów na mysz, wlewano lepirudynę (8 U / g myszy) i wytwarzano dodatkowe 9. 10 zakrzepów na mysz. Łącznie 28 skrzeplin przed infuzją i 29 skrzeplin po infuzji badano u 3 myszy. Czarny, przed infuzją; szary, po infuzji. Dyskusja W tym badaniu oddzielnie monitorowaliśmy aktywację płytek krwi i akumulację płytek krwi u myszy pozbawionych vWF przy użyciu indukowanego przez laser uszkodzenia ściany naczynia, modelu zakrzepicy, który jest zdominowany przez wytwarzanie trombiny za pośrednictwem czynnika pośredniczącego w tkankach, ale w którym akumulacja płytek wydaje się być w dużej mierze niezależna od GPVI i kolagen w warunkach, które stosujemy (12, 16). Nasze wyniki wskazują, że aktywacja płytek krwi, monitorowana bezpośrednio przez mobilizację wapnia, jest normalna u myszy bez vWF. Wnioskujemy, że vWF nie jest wymagany do aktywacji płytek krwi podczas tworzenia skrzepliny w okolicznościach, w których dominuje szlak wytwarzania za pośrednictwem trombiny za pośrednictwem czynnika tkankowego. Jednak akumulacja płytek jest osłabiona pod nieobecność vWF, jak opisano wcześniej (9). Te wyniki są nieoczekiwane z 2 powodów. Po pierwsze, vWF okazało się wiązać i aktywować płytki krwi w badaniach przepływu in vitro, z mechanicznym oddziaływaniem vWF i płytkami krwi, prowadząc do wewnątrzkomórkowej mobilizacji wapnia (17). Jednakże odkrywamy, że in vivo, przy braku znacznej ekspozycji na kolagen, a nawet przy wysokim ścinaniu, funkcja dokowania vWF nie jest wymagana do aktywacji płytek krwi. Jest to najprawdopodobniej spowodowane wewnętrznymi różnicami w projekcie eksperymentalnym, ponieważ Mazzucato i in. (11) przeprowadzili eksperymenty in vitro z wysoką gęstością vWF przylegającą do fazy stałej i w obecności hirudyny w celu zablokowania aktywności trombiny, podczas gdy obecne doświadczenia przeprowadzono na żywej myszy pod nieobecność antykoagulantów, w tym inhibitorów trombiny
[przypisy: leczenie kanałowe białystok, atopowe zapalenie skory zdjecia, portius krosno godziny otwarcia ]
[patrz też: zapalenie woreczka łzowego, glykopeel, poliploidalność ]