Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego ad 6

2 tygodnie ago

751 words

Po drugie, uważa się, że włączenie płytek krwi do skrzepliny w uszkodzonym naczyniu i aktywacja płytek występują jednocześnie. Jednakże wykazaliśmy, że skrzeplina płytek zawiera dużą liczbę płytek krwi, które nie ulegają aktywacji i które pozostają przejściowo związane z rozwijającym się skrzepliną. Punkt ten jest wyraźnie ustalony przez dużą liczbę nieaktywnych płytek krwi (zielony) na obrazach rozwijającego się zakrzepu na Figurze 2A, przedstawiającego akumulację płytek. Podstawą aktywacji płytek jest mobilizacja wewnątrzkomórkowego wapnia. Poziomy cytozolowego Ca2 + wzrastają od poziomów podstawowych około 50-120 nM w niestymulowanych płytkach do poziomu mikromolowego w aktywowanych płytkach krwi, w zależności od siły działania agonisty. Jako drugi przekaźnik mobilizacja wapnia pośredniczy w wielu funkcjach płytek, takich jak zmiana kształtu, wydzielanie płytek krwi i aktywacja różnych integryn rezydujących na błonie płytkowej (18, 19). W badaniach in vitro w warunkach statycznych lub przepływowych zidentyfikowano szlaki wewnątrzkomórkowe prowadzące do mobilizacji wewnątrzkomórkowego wapnia po adhezji płytek krwi. W modelu statycznym trombina indukuje mobilizację wapnia w płytkach krwi, prowadząc do aktywacji specyficznych integryn i wydzielania ziaren płytek krwi. W eksperymentach perfuzyjnych, w których przepływ dostosowywany jest do szybkości ścinania tętnic, adhezja płytek krwi wymaga najpierw wiązania kompleksu GPIb-IX-V na powierzchni płytek z vWF (1, 5, 20, 21). Ta interakcja prowadzi do kolejnych rzędnych [Ca2 +] i. Pierwszy pik (a / a), związany z mechaniczną stymulacją i szybkim uwalnianiem Ca2 + z magazynów wewnątrzkomórkowych, jest sprzężony z pierwszym etapem aktywacji (3l, 3j3 (11, 15, 22). Późniejsze wiązanie aktywowanego a IIbp3 do vWF i fibrynogenu prowadzi do drugiej podwyższenia Ca2 + ((pik) o większej amplitudzie i czasie trwania, co jest konieczne do stabilnej aktywacji integryn i nieodwracalnej adhezji i agregacji płytek krwi (23). Na koniec, ciągła stymulacja P2Y1 i P2Y12 skutkująca cyklicznymi oscylacjami [Ca2 +] i wydaje się być niezbędna do utrzymania stanu aktywacji AIlbp3 wymaganego do stabilności skrzepu w płynącej krwi (24). Zaadaptowaliśmy dobrze opracowaną technikę monitorowania stanów przejściowych wapnia w żywych komórkach, aby śledzić mobilizację wapnia w płytkach krwi podczas tworzenia skrzepliny u żywej myszy. Chociaż nie jesteśmy w stanie określić ilościowo wewnątrzkomórkowych stężeń wapnia w komórkach w krążeniu za pomocą obrazowania współczynnika (25), ustaliliśmy, że uważamy, że jest to nowa metoda monitorowania aktywacji płytek in vivo. Możemy zmierzyć aktywację płytek in vivo z wysoką przestrzenną i czasową rozdzielczością, zapewniając nowy wgląd w ten proces podczas tworzenia skrzepliny u żywej myszy. Na przykład, stosując mobilizację wapnia jako reporter aktywacji płytek krwi, wykazaliśmy, że vWF nie jest wymagany do mobilizacji wapnia. Ponadto obserwowaliśmy przejściową adhezję płytek potraktowanych BAPTA-AMP do rozwijającego się skrzepliny, co wskazuje, że tethering płytek krwi do rozwijającego się skrzeplina jest niezależny od mobilizacji wapnia u żywej myszy. Nasze eksperymenty in vivo na tętniczkach w mikrokrążeniu mięśnia Cremastera przeprowadzono w miejscach, w których szybkości ścinania wynosiły około 1500 s. 1. W tych warunkach powstawanie zakrzepu płytek krwi jest zależne od vWF. Mimo że płytki mysie są mniejsze, ale są one liczniejsze, nasze eksperymenty in vivo (Figura 3A), jak również inne (6, 9, 26) wskazują, że w tych warunkach tworzenie płytek krwi jest również zależne od vWF w myszach cremaster i krezka tętniczki. Wcześniejsze badania powstawania skrzepu w tętniczkach vWF. /. u myszy zastosowano model chlorku żelazowego uszkodzenia naczyń (9), inny model zakrzepicy, w którym tworzenie skrzeplin wymaga ekspresji GPVI i ekspozycji kolagenu w macierzy podśródbłonkowej. Nasze obecne wyniki sugerują, że rola vWF w aktywacji płytek krwi może być ograniczona do szlaku GPVI kolagen-płytka, gdzie interakcja vWF z płytkami jest krytyczna. Jednak, jak wykazano w obecnym badaniu, aktywacja płytek krwi, gdy inicjowana przez trombinę, produkt końcowy szlaku z udziałem czynnika tkankowego, jest niezależna od vWF. Ta koncepcja byłaby całkowicie zgodna z obserwacjami, że choroba von Willebranda nie jest w pełni ochronna przed chorobą zakrzepowo-zatorową, szczególnie aterotromboozą, ponieważ choroby te charakteryzują się istotną rolą trombiny. Metody Myszy. WT C57BL / 6J, vWFa / p, i FcRaq / r. myszy uzyskano z The Jackson Laboratory
[patrz też: fit med salon, zapalenie woreczka łzowego, pomidory suszone przepis ]
[hasła pokrewne: młody jęczmień green ways, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, leczenie kanałowe białystok ]