Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego ad

2 tygodnie ago

37 words

Stała wiązania, Kd fura-2 dla Ca2 + wynosi 0,14 M M, a więc fluorochrom jest wrażliwy na zmiany wewnątrzkomórkowego stężenia Ca2 + ([Ca 2+] i), gdy w stanie spoczynkowym stężenia Ca 2+ są znacznie niższe niż 0,14 Dzięki cytometrii przepływowej, trombiny aktywowane trombiną, ale nie spoczywające na płytkach obciążonych fura-2p, eksprymowały P-selektynę na swojej powierzchni, zapewniając, że fura-2 nie prowadzi do aktywacji lub zakłócenia aktywacji płytek krwi (Figura 1A). Gdy spoczynkowe płytki były wzbudzane przy 380 nm i przy 340 nm in vitro, połączone obrazy tych emisji fluorescencji obserwowane przy 510 nm były zdominowane przez wzbudzenie przy 380 nm (Figura 1B, górny rząd, zielony pseudokolor), ale bez emisji fluorescencji obserwowano przy wzbudzeniu przy 340 nm (rysunek 1B, górny rząd, czerwony pseudokolor). Scalone obrazy fluorescencji przy 510 nm po wzbudzeniu aktywowanych płytek przy 380 nm i przy 340 nm wykazały, że fura-2 występuje zarówno w stanie Ca2 +, jak i wolnym od Ca2 + w tych komórkach, tak że aktywowane płytki były głównie połączone z żółtymi pseudo- kolor (rysunek 1B, dolny rząd). Figura Właściwości płytek obciążonych fura-2. in vitro i in vivo. (A) ekspresja P-selektyny, określona za pomocą analizy FACS, na niestymulowanych lub aktywowanych trombiną płytkach myszy zawierających fura-2 / AM. (B) Mobilizację wapnia w niestymulowanych (z pierwszego rzędu) lub aktywowanych trombiną płytek z myszami obciążonymi fura-2 (dolny rząd) oznaczono metodą mikroskopii fluorescencyjnej in vitro. Emisja przy 510 nm po wzbudzeniu przy 380 nm jest przedstawiona na zielono, podczas gdy emisja przy 510 nm po wzbudzeniu przy 340 nm jest przedstawiona na czerwono. Scalenie jest przedstawione na żółto. (C) Płytki obciążone czerwono-pomarańczową kalceiną AM lub fura-2 / AM wstrzyknięto do krążenia myszy i wywołano uszkodzenie ściany naczynia. Obrazy tworzenia skrzepliny wskazują płytki zawierające kalceinę (czerwony) i płytki krwi zawierające fura-2 / AM (zielony). (D) Średnią zintegrowaną intensywność fluorescencji czerwono-pomarańczowych płytek znakowanych kalceiną (3 lub płytek znakowanych fura-2 . w 18 skrzeplinach od 3 myszy wykreśla się w funkcji czasu. Skuteczność monitorowania rekrutacji płytek krwi do rozwijającego się zakrzepu przy użyciu fura-2 wzbudzonego przy 380 nm wykazano przez jednoczesne wlewanie płytek krwi (150 x 106) inkubowanych z fura-2 / AM lub czerwono-pomarańczową kalceiną AM do krążenia WT. mysz. Dziesięć minut później wywołane laserem uszkodzenie ściany tętniczek zapoczątkowało tworzenie skrzepliny, a fluorescencję wewnątrzkomórkową i obrazy jasnego pola rejestrowano z wzbudzeniem czerwono-pomarańczowej kalceiny przy 570 nm i wzbudzaniem fura-2 przy 380 nm (Figura 1C). Te 2 populacje płytek wykazują podobną kinetykę włączania do rosnącego skrzepliny (Figura 1D). W oddzielnych doświadczeniach wlewano płytki krwi dawcy (150 x 106 płytek krwi) obciążonych zarówno kalou-2 / AM, jak i czerwonopomarańczową kalceiną AM do krążenia myszy WT i obserwowano, że sygnały fluorescencyjne odpowiadające czerwono-pomarańczowej kalceinie i fura-2 wzbudzony przy 380 nm kolokalizowany w rozwijającym się skrzepie (dane nie pokazane). Wnioskujemy, że płytki krwi zawierające fura-2 / AM mają prawidłową funkcję płytek krwi w kontekście włączenia płytek krwi do rozwijającego się zakrzepu i że fura-2 / AM może być stosowana jako alternatywa dla kalceiny do monitorowania wprowadzania płytek krwi do skrzeplin. Wewnątrzkomórkowy status wapnia krążących płytek krwi obwodowo-skrzepowych in vivo. Wykonano śródszpitalną mikroskopię szerokopasmową, aby uwidocznić akumulację płytek fura-2 / AM w jednym kanale po wzbudzeniu przy 380 nm, mobilizację wapnia w płytkach obciążonych fura-2 / AMP w drugim kanale po wzbudzeniu przy 340 nm, i obraz jasnego pola w trzecim kanale (rysunek 2A). Do żywej myszy dodaliśmy 250 x 106 do 300 x 106 płytek, co odpowiada w przybliżeniu 20% całkowitej endogennej liczby płytek krwi. Wszystkie krążące płytki krwi obciążone fura-2 / AM miały poziomy wapnia charakterystyczne dla spoczynkowych płytek krwi. Płytki obciążone Fura-2 (3, monitorowane przez wzbudzenie przy 380 nm, gwałtownie związane z miejscem uszkodzenia lasera. Mobilizacja wapnia w płytkach obciążonych fura-2, uczestniczących w rozwijającym się skrzepie, została wykryta z wzbudzeniem przy 340 nm (Figura 2).
[hasła pokrewne: fitomed krem nawilżający tradycyjny, fit med, sennik pocałunek w policzek ]
[przypisy: fit med salon, fitmed, fit med ]