Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego cd

2 miesiące ago

580 words

U myszy WT, naładowane fura-2 (3 płytki przylegały, gromadziły się i mobilizowały wewnątrzkomórkowy wapń w miejscu uszkodzenia. W 18 skrzeplinach wywoływanych u 3 myszy obliczono medianę akumulacji płytek naładowanych fura-2 (Fig. 2B) i medianę mobilizacji wapnia (Figura 2D) w czasie. Płytki załadowane Fura-2 (3 szybko gromadziły się w miejscu uszkodzenia ściany naczynia, następnie skrzepy zmniejszyły się, a liczba płytek obciążonych fura-2 (3 zmniejszyła się (Figura 2B). Gdy płytki z obciążeniem fura-2 traktowano chelatorem wapnia BAPTA-AM przed infuzją myszy donorowej, mobilizacja wapnia była hamowana (Figura 2C). Traktowane BAPTA-AMP, płytki fura-2 (3 przejściowo związane z rozwijającym się skrzepliną (Figura 2B) i nie mobilizowały wapnia (Figura 2D). Wyniki te wskazują, że aktywacja płytek monitorowana przez mobilizację wapnia występuje w rozwijającym się skrzeplinie in vivo w naszym modelu zakrzepicy. Jednak płytki krwi są zdolne do odwracalnego wiązania się z rozwijającym się zakrzepem niezależnie od mobilizacji wapnia lub przed. Figura 2 Obrazowanie in vivo mobilizacji wapnia podczas aktywacji płytek podczas tworzenia skrzepliny u myszy WT. Płytki izolowane od myszy WT obciążono fura-2 / AM. Płytki krwi (250 x 106 do 300 x 106 komórek) wprowadzono do krążenia myszy WT. Po wywołanym laserem uszkodzeniu ściany naczynia obserwowano powstawanie zakrzepu i obrazy rejestrowano w czasie. (A) Reprezentatywne obrazy kompozytowe danych fluorescencji i pola jasnego przedstawiające tworzenie się skrzeplin wykazują fura-2. Naładowany akumulację płytek (zielony, żółty) i mobilizację wapnia (żółty). Przed, przed kontuzją. (B) Kumulacja płytek krwi podczas formowania się skrzeplin reprezentowana przez medianę zintegrowanej intensywności fluorescencji (oś y) płytek znakowanych fura-2P wzbudzonych przy 380 nm. Płytki krwi badano pod nieobecność (górna krzywa) lub obecność (dolna krzywa) BAPTA-AM. Płytki F, mediana zintegrowanej fluorescencji płytek, z wzbudzeniem przy 380 nm i emisją przy 510 nm. (C) Reprezentatywne złożone obrazy fluorescencji i pola jasnego, przedstawiające tworzenie się skrzeplin, wykazują akumulację płytkową naładowaną fura-2 (zielony, żółty) i mobilizację wapnia (żółtą) w obecności BAPTA-AM. (D) Mobilizacja wapnia podczas tworzenia skrzepliny przedstawiona przez medianę zintegrowanej intensywności fluorescencji (oś y) płytek znakowanych fura-2 . wzbudzonych przy 340 nm. Płytki krwi badano pod nieobecność (górna krzywa) lub obecność (dolna krzywa) BAPTA-AM. Dane te stanowią medianę eksperymentów przeprowadzonych na 18 skrzeplinach od 3 myszy. F kalceina, mediana zintegrowanej fluorescencji sygnału odpowiadającego płytkom znakowanym kalceiną. vWF jest ważny dla akumulacji płytek krwi podczas tworzenia się skrzeplin in vivo. Przestrzenna i czasowa rozdzielczość 2 cech początkowego rozwoju zakrzepu została określona za pomocą vWF. /. i myszy WT. Aktywację płytek monitorowano przez mobilizację wapnia, a gromadzenie płytek na ścianie naczynia monitorowano przy użyciu przeciwciała znakowanego fluorescencyjnie skierowanego przeciwko CD41 (12). U myszy WT płytki krwi przylegały i gromadziły się szybko w miejscu urazu, przyczyniając się do wczesnej fazy gromadzenia się płytek. Skrzeplina gwałtownie wzrosła do maksymalnego rozmiaru, a następnie zmniejszyła się (rysunek 3A, odnośnik 13). vWF. /. myszy wykazywały podobną kinetykę akumulacji płytek (figura 3A). Pomimo braku vWF, myszy te miały znaczące tworzenie płytek krwi, chociaż maksymalny rozmiar zakrzepów był zmniejszony w porównaniu z tym u myszy WT (Figura 3A). Gdy porównano czas do maksymalnej wielkości skrzepliny w 43 skrzeplinach u myszy 4 WT i 39 skrzeplin w 4 vWF. /. myszy, nie zaobserwowano znaczącej różnicy (Figura 3B). Jednakże zaobserwowano znaczące zmniejszenie (P <0,001) wielkości skrzeplin w vWFa / r. myszy w porównaniu z myszami WT (Figura 3C). Największe skrzepy obserwowane w vWF. /. myszy nie były ograniczone do jednego vWF. /. zwierząt, ale zostały rozdzielone między wszystkie vWF. /. myszy. Ta różnica w wielkości skrzepliny pomiędzy WT i vWF. /. Mysz została potwierdzona przez wykreślenie kwadrylliowego rozkładu wielkości skrzepliny (Figura 3D). Trzydzieści procent zakrzepów powstających w vWF. /. myszy były obecne w pierwszym kwartylu, reprezentującym najmniejsze skrzepy, w porównaniu do 20% dla myszy WT. Tylko 18% zakrzepów powstaje w vWFa /. myszy były dystrybuowane w największym kwartylu, w porównaniu do 34% myszy WT. Wyniki te wskazują, że maksymalny rozmiar zakrzepu był znacznie zmniejszony w vWFa /. myszy w porównaniu z myszami WT. Jednak kinetyka powstawania skrzeplin była podobna. Figura 3 Nagromadzenie płytek podczas tworzenia skrzepliny po uszkodzeniu ściany naczynia w WT i vWF. /. myszy. Płytki krwi znakowano anty-mysimi fragmentami CD41 Fab sprzężonymi z Alexa Fluor 647 [patrz też: sennik pocałunek w policzek, fundacja stwardnienie rozsiane, kotlety mielone bez jajka ] [podobne: chomik syryjski ile żyje, portius krosno godziny otwarcia, odżywki na mase mięśniową ]