Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego czesc 4

3 miesiące ago

95 words

Mediana zintegrowanej fluorescencji płytek krwi (oś y) dla 43 skrzeplin u myszy 4 WT i dla 39 skrzeplin w 4 vWFa /. myszy przedstawiono w funkcji czasu po uszkodzeniu ściany naczynia. (B) Rozkład czasu na osiągnięcie maksymalnego rozmiaru dla każdego skrzepliny u myszy WT i w vWF. /. myszy. Nie zaobserwowano znaczącej różnicy w teście sumy rang Wilcoxona. (C) Rozkład zintegrowanej fluorescencji płytek krwi dla każdego skrzepliny w WT i vWF. /. myszy w maksymalnym rozmiarze. Trombi WT były znacznie większe niż vWF. /. skrzepy za pomocą testu sumy rang Wilcoxona (P <0,001). (D) Rozkład kwartalny maksymalnej zintegrowanej fluorescencji płytek krwi dla każdego skrzepliny w WT i vWFa /. myszy. Czterdzieści trzy zakrzepy u myszy WT i 39 skrzeplin w vWF. /. myszy zostały uszeregowane, a odsetek skrzeplin każdego genotypu ustalono niezależnie w każdym kwartylu kolejności rang. Czarne słupki, myszy WT; białe paski, vWF. /. myszy. vWF nie jest wymagany do aktywacji płytek krwi podczas tworzenia skrzepliny in vivo. W poprzednich badaniach in vitro opisano 2 piki wapnia na płytkę krwi, gdy płytki krwi w komorze przepływu stykają się z unieruchomionym vWF. Pierwszy pik jest zależny od interakcji płytek z vWF i został zinterpretowany jako ważny sygnał dla aktywacji AIlbp3 (11, 14, 15). Aby ustalić, czy vWF jest wymagany in vivo do aktywacji płytek krwi. niezależnie od jego roli w adhezji i agregacji płytek krwi. Aktywacja płytek w miejscu uszkodzenia naczyń była badana w vWF. /. myszy. Chociaż u tych myszy atenuowano gromadzenie się płytek krwi (Figura 3A), obserwowano aktywację płytek monitorowaną przez mobilizację wapnia w vWFa / p myszy (Figura 4A). Analiza statystyczna mediany fluorescencji związanej z mobilizacją wapnia w wielu skrzeplinach w WT i vWFa /. myszy pozwoliły na ilościową aktywację płytek u tych myszy (Figura 4B). Aby obliczyć mobilizację wapnia na płytkę krwi (Figura 5A), mediana zintegrowanej fluorescencji związanej z aktywowanymi płytkami krwi porównano ze średnią zintegrowaną fluorescencją związaną z całkowitymi płytkami krwi zgromadzonymi w skrzepie (Figura 5B). To podejście zostało potwierdzone w doświadczeniach in vitro, w których ustalono krzywą kalibracji porównując fluorescencję związaną z mobilizacją wapnia podzieloną przez całkowitą fluorescencję płytek krwi jako funkcję procentu płytek krwi zdolnych do poddania się mobilizacji wapnia (Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online). z tym artykułem: doi: 10.1172 / JCI30537DS1). W oddzielnych doświadczeniach in vivo badano pojedynczą płytkę fluorescencyjną pod kątem mobilizacji wapnia, co umożliwia bezpośrednie obliczenie mobilizacji wapnia na płytkę krwi (dane nie przedstawione). Ten pomiar na poszczególnych płytkach krwi potwierdził wyniki uzyskane przez badanie fluorescencji wielu płytek krwi w skrzepie płytkowym. Te eksperymenty pozwoliły nam wyciągnąć wniosek, że aktywacja płytek jest równoważna w WT i vWF. /. myszy w tym modelu zakrzepicy. Figura 4 Obrazowanie in vivo mobilizacji wapnia podczas aktywacji płytek krwi podczas tworzenia skrzepliny w vWFa /. myszy. (A) Płytki krwi izolowane z vWF. /. myszy obciążono fura-2 / AM. Płytki krwi (250 x 106 do 300 x 106 komórek) wlewano do krążenia vWFa / y. mysz. Po wywołanym laserem uszkodzeniu ściany naczynia obserwowano powstawanie zakrzepu i obrazy rejestrowano w czasie. (A) Reprezentatywne obrazy kompozytowe danych fluorescencji i pola jasnego przedstawiające tworzenie się skrzeplin wykazują akumulację płytkową naładowaną fura-2 (zielony, żółty) i mobilizację wapnia (żółtą) w vWFa /. mysz. (B) Mobilizacja wapnia podczas tworzenia skrzepliny reprezentowana przez medianę zintegrowanej intensywności fluorescencji (oś y) płytek znakowanych fura-2 . wzbudzonych przy 340 nm. Czarny: myszy WT; niebieski: vWF. /. myszy. Figura 5 Mobilizacja wapnia na płytkę u myszy WT, vWFa /. myszy, FcR /. myszy i myszy WT leczonych lepirudyną. W celu obliczenia mobilizacji wapnia na płytki krwi, porównano proporcje sygnałów odpowiadających akumulacji płytek i mobilizacji wapnia (co oceniono na podstawie mediany zintegrowanej intensywności fluorescencji każdego z nich). (A) Kumulacja płytek. (B) Mobilizacja wapnia na płytkę, przedstawiona jako stosunek. FcR. / ., FcR. /. myszy pozbawione GPVI; WT + lepirudyna, myszy WT traktowane lepirudyną. GPVI nie jest wymagany do mobilizacji wapnia podczas tworzenia skrzepliny po uszkodzeniu laserem. Wcześniej wykazaliśmy, że akumulacja płytek krwi związana z laserowym uszkodzeniem ściany naczynia w warunkach, które stosujemy, nie zależy ani od obecności GPVI płytek krwi, ani od ekspozycji na wykrywalny kolagen na ścianie naczynia (12) [podobne: młody jęczmień green ways, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, fit med ] [hasła pokrewne: jęczmień green ways, kotlety mielone bez jajka, sennik pocałunek w policzek ]