Skip to content

Inaktywacja aktywowana płytkami in vitro trombiny jest niezależna od vWF podczas tworzenia skrzepliny w modelu urazu laserowego

2 tygodnie ago

808 words

Adhezja płytek krwi do ściany uszkodzonego naczynia i aktywacja płytek są krytycznymi zdarzeniami w tworzeniu skrzepliny. Spośród agonistów zaangażowanych w aktywację płytek krwi, trombina, kolagen i vWF powodują mobilizację wapnia in vitro w płytkach krwi. Przy użyciu fluorochromu wrażliwego na wapń i cyfrowej wielokanałowej mikroskopii intravitalnej do obrazowania niestymulowanych i stymulowanych płytek, mobilizację wapnia monitorowano jako reporter aktywacji płytek krwi (w odróżnieniu od akumulacji płytek) podczas tworzenia skrzepu u myszy żywych. W nieobecności vWF aktywacja płytek była prawidłowa, ale przyleganie płytek krwi i agregacja zostały osłabione podczas tworzenia się skrzepliny po wywołanym laserem uszkodzeniu w mikrokrążeniu mięśni Cremaster a. U myszy WT leczonych lepirudyną aktywacja płytek krwi była zablokowana, a adherencja płytek i agregacja zostały zahamowane. Kinetyka aktywacji płytek krwi i akumulacji płytek była podobna w FcRy3 / y. myszy pozbawione glikoproteiny VI (GPVI), myszy zubożone w GPVI i myszy WT. Nasze wyniki wskazują, że szlak pośredni, w którym pośredniczy czynnik tkankowy, generujący trombinę, ale nie indukowany kolagenem szlak, w którym pośredniczy GPVI, jest główną ścieżką prowadzącą do aktywacji płytek krwi po wywołanym laserem uszkodzeniu w zastosowanych warunkach. W szlaku zależnym od czynnika tkankowego vWF odgrywa rolę w akumulacji płytek podczas tworzenia skrzepliny, ale nie jest wymagana do aktywacji płytek krwi in vivo. Wstęp Adhezja i agregacja płytek krwi do uszkodzonej ściany naczynia są krytycznymi krokami podczas tworzenia skrzepliny. Gdy płytki krwi stają się adherentne, są aktywowane i rekrutują dodatkowe krążące płytki krwi, prowadząc do powstania zakrzepu (przegląd, patrz punkty odniesienia 1-3). Przy wysokich szybkościach ścinania vWF związany z ścianą naczynia wiąże się z receptorem płytkowym glikoproteiny Ib (GPIb). Ta interakcja ustanawia przejściowe wiązanie płytki z ścianą naczynia i unieruchamia płytki w miejscu urazu (4, 5). Przy fizjologicznych szybkościach ścinania, zarówno GPIb / V / IX, jak i integryna a IIbp3 uczestniczą w tworzeniu wewnątrzkomórkowych uwięzi pomiędzy płytkami, prowadząc do tworzenia stabilnych agregatów płytek krwi (6). Wiązanie vWF z GPIb indukuje również aktywację płytek krwi, co zostało wykazane przez wewnątrzkomórkową mobilizację wapnia i prowadzi do aktywacji integryny a IIbp3 na powierzchni płytek krwi (7, 8). Po tym pierwszym etapie adhezji, oddziaływania receptor-ligand synergistycznie sprzyjają stabilnej adhezji płytek krwi. Spośród nich wiązanie GPVI z kolagenem, integryną a2a1 z kolagenem lub fibrynogenem i integryna a IIbp3 z fibrynogenem lub vWF prowadzi do stabilnej akumulacji płytek in vitro. W przeciwieństwie do wyników z eksperymentów in vitro, w których wykazano, że vWF jest niezbędny do początkowej adhezji płytek krwi, akumulacja płytek i tworzenie się skrzeplin były znacznie osłabione, ale nie są one nieobecne w badaniach in vivo z użyciem vWFa / y. myszy i model zakrzepicy w chlorku żelazowym (9, 10). Biorąc pod uwagę centralną rolę vWF we wstępnej mobilizacji wapnia w płytkach krwi ustalonych w badaniach in vitro (11), zbadaliśmy rolę vWF in vivo w aktywacji płytek krwi poprzez bezpośredni monitoring mobilizacji wapnia w płytkach jako reporter aktywacji płytek; oraz przez monitorowanie gromadzenia się płytek krwi podczas tworzenia skrzepliny u żywego zwierzęcia przy użyciu wielokanałowej intravitalnej mikroskopii fluorescencyjnej. W naszym modelu tworzenie skrzepliny jest inicjowane przez wywołane laserem uszkodzenie ściany naczyń tętniczek w mikrokrążeniu cremastera myszy w określonych warunkach i parametrach. Szybkości ścinania w tętnicach Cremera mieszczą się w zakresie od 1400 do 1600 s. 1. Rozdzielczość czasową i przestrzenną 2 cech początkowego rozwoju zakrzepu można określić in vivo: (a) aktywacja płytek krwi poprzez monitorowanie mobilizacji wapnia w poszczególnych płytkach; i (b) akumulację płytek, z maksimum około 100 sekund. Korzystając z tego systemu, wykazaliśmy, że w zastosowanych warunkach vWF nie jest wymagany do aktywacji płytek krwi in vivo, chociaż odgrywa rolę w akumulacji płytek krwi podczas wzrostu skrzepliny. Ścieżka aktywacji płytek, w której pośredniczy trombina, jak zaobserwowano w naszym modelu zakrzepicy wywołanym laserem, jest niezależna od vWF, podczas gdy zależna od kolagenu ścieżka aktywacji płytek krwi, oceniona przy użyciu modelu skrzepu żelazowego, może być zależna od vWF. Wyniki Włączenie płytek naładowanych fura-2 do rozwijającego się skrzepliny. Fura-2 / AM jest fluorochromem wiążącym jony wapnia, stosowanym do pomiaru wewnątrzkomórkowej mobilizacji wapnia. Fura-2 charakteryzuje się wyraźnymi właściwościami spektralnymi w obecności niskich i wysokich stężeń Ca2 +
[przypisy: jak bezpiecznie spędzić wakacje, niedobór witaminy d u dorosłych objawy, portius krosno godziny otwarcia ]
[hasła pokrewne: fundacja stwardnienie rozsiane, fitomed krem nawilżający tradycyjny, przepisy w diecie dukana ]