Skip to content

Indukcja regulatora sygnału cytokin SOCS3 / CIS3 jako strategia terapeutyczna w leczeniu zapalenia stawów czesc 4

1 miesiąc ago

427 words

Ekspresja mRNA CIS3 u pacjentów z RA lub OA oraz w mysim modelu AIA lub CIA. Całkowity RNA ekstrahowano z trzech pacjentów z OA i RA. tkanki maziowe lub stawy kostne myszy leczonych mBSA (AIA) lub kolagenem bydlęcym typu II (CIA). W przypadku AIA mBSA wstrzyknięto w dniach 0, 7 i 21. W przypadku CIA kolagen typu II wstrzyknięto w dniach 0 i 21, a RNA ekstrahowano we wskazanych dniach. Hybrydyzację Northern przeprowadzono za pomocą sond cDNA dla regionów kodujących ludzki i mysi CIS3 oraz z sondą kontrolną. (c) Ekstrakty komórkowe z tych samych próbek CIA poddano immunoblottingowi za pomocą antyfosforylowanych STAT3 (PY-STAT3) lub przeciwciał anty-STAT3 (STAT3). Przeanalizowaliśmy także ekspresję CIS3 za pomocą myszy AIA i modeli CIA. AIA jest zwierzęcym modelem zapalenia stawów początkowo indukowanym u królików i rozciągniętym na myszy (23). Chociaż AIA jest modelem jednoośrodkowego zapalenia stawów, ma tę zaletę, że precyzyjnie i rzetelnie dokonuje porównań histologicznych między poszczególnymi myszami. Myszy immunizowano mBSA w dniach 0, 7 i 20, a zapalenie stawów stało się ciężkie w dniu 28. mRNA CIS3 obserwowano na niskich poziomach w prawidłowych tkankach stawowych. Jednak poziom mRNA CIS3 wzrósł wraz z rozwojem zapalenia stawów (ryc. 1b). CIA jest dobrze ugruntowanym zwierzęcym modelem RA, w którym choroba jest wywoływana przez immunizację genetycznie wrażliwych myszy kolagenem typu II i ma wiele cech histologicznych oraz odpowiedzi odpornościowe komórkowe i humoralne charakterystyczne dla RA (24). Zapalenie stawów stało się ciężkie w 40 dniu (patrz Figura 5a i Figura 6), a fosforylacja STAT3 była widoczna w dniu 40, ale zmniejszyła się w dniu 50 (Figura 1c), podczas gdy poziomy mRNA dla CIS3 drastycznie wzrosły w dniu 50 (Figura 1b). Wydaje się, że istnieje opóźnienie czasowe między aktywacją stanu zapalnego / STAT3 a ekspresją CIS3. Jest to zgodne z naszym pomysłem, że funkcja CIS3 jest ujemnym regulatorem sprzężenia zwrotnego STAT3. Figura 5 Terapeutyczne efekty wstrzyknięcia wirusa CIS3 w modelu CIA. Myszy DBA / 1J immunizowano przez śródskórną iniekcję u podstawy ogona 100 .g bydlęcego kolagenu typu II z kompletnym adiuwantem Freunda (dzień 0). W dniu 21 myszy otrzymały dawkę przypominającą śródskórnego wstrzyknięcia. W 28 dniu wstrzykiwano LPS dootrzewnowo, a adenowirusy wstrzykiwano do stawów skokowych i nadgarstków. (a) Ciężkość choroby oceniano co drugi dzień, stosując ustalony makroskopowy system punktacji w zakresie od 0 do 4 dla każdej kończyny. Dane przedstawiają średni wynik kliniczny pięciu myszy z każdej grupy. (b) Obserwacje makroskopowe kostek myszy leczonych wirusami LacZ, CIS3 lub dnSTAT3 w dniu 50. W (c), tkanki stawu skokowego wybarwiono HE i Safraniną O (x 100). * P <0,01. Figura 6 Wpływ adenowirusa CIS3 na ustalone zapalenie stawów. Wirusy podawano przez wstrzyknięcie okołostawowe do stawów nadgarstków i stawów skokowych myszy 4 dni po wstrzyknięciu LPS. Ciężkość choroby oceniano co drugi dzień w zakresie od 0 do 4 dla każdej kończyny dolnej. Dane przedstawiają średni wynik kliniczny pięciu myszy z każdej grupy. * P <0,01, ** P <0,05. Przeniesienie genu CIS3 zmniejsza proliferację i poziom IL-6 w fibroblastach maziówkowych RA. Aby wyjaśnić znaczenie aktywacji STAT3 i indukcji CIS3 w RA, poddaliśmy nadekspresji dnSTAT3 i CIS3 w synowiocytach RA wyizolowanych od pacjentów, stosując transfer genów adenowirusa. Zakażono hodowane fibroblasty maziowe in vitro adenowirusem niosącym CIS3 (AxCACIS3), dnSTAT3 (AxCAdnSTAT3) lub LacZ (AxCALacZ). Adenowirus był inokulowany w moi = 50, a 100% komórek było zakażonych, jak oceniono przez barwienie LacZ (dane nie przedstawione). AxCACIS3 i AxCAdnSTAT3, ale nie zakażenie AxCALacZ, silnie hamowały proliferację fibroblastów maziowych w 10% FCS (Figura 2a). Zatem proliferacja fibroblastów maziówkowych ściśle zależy od szlaku JAK / STAT3. Supresja proliferacji przez CIS3 i dnSTAT3 nie była obserwowana w fibroblastach NIH-3T3 (Figura 2b), co sugeruje, że zależny od STAT3 wzrost jest specyficzną cechą fibroblastów maziówkowych. Ryc. 2 Wpływ nadekspresji dnSTAT3 i CIS3 na proliferację i wydzielanie cytokin fibrylastów maziówkowych RA. (aib) Krzywe wzrostu komórek reumatoidalnych synowiocytów i komórek NIH-3T3 zaszczepionych adenowirusem LacZ, dnSTAT3 lub CIS3 (moi = 50). Dane reprezentują średnią. SD z potrójnych pomiarów. (c i d) Synoviocyty reumatoidalne zaszczepione wirusem LacZ, CIS3 lub dnSTAT3 hodowano przez 24 godziny w obecności 10% FCS (c) lub pod nieobecność (a) lub obecności (+) 10 ng / ml TNF- . w 0,1% FCS (d). Następnie, oznaczono stężenia TNF-a, IL-ip i IL-6 w kondycjonowanej pożywce za pomocą testu ELISA. Dane są wyrażone jako średnie. SD pochodzi z trzech oddzielnych eksperymentów [więcej w: leczenie kanałowe białystok, przepisy w diecie dukana, atopowe zapalenie skory zdjecia ] [przypisy: fit med, chomik syryjski ile żyje, portius krosno godziny otwarcia ]