Skip to content

Mutacja zmiany sensu w KCNA1 kodującym bramkowany kwasem potasowym genu kanału potasowego związana jest z ludzką autosomalną dominującą hipomagnezemią. ad

2 tygodnie ago

763 words

Przewidywana topologia aminokwasów kanałów Kv pokazuje 6 segmentów a-helikalnych (obejmujących transbłonę) (tj. S1-S6), z segmentem S4 działającym jako czujnik napięcia i hydrofobowym obszarem porów pomiędzy S5 i S6 (Figura 1E) (15) . Nowo zidentyfikowana mutacja N255D jest umieszczona w trzecim odcinku transbłonowym (S3) blisko czujnika napięcia (rysunek 1E). Figura 1. Mutacja Heterozygous KCNA1 A763G powoduje wydzieloną hipomagnezemię. (A) Rodowód z 5 pokoleniami (I. V) brazylijskiej rodziny z autosomalną dominującą hipomagnezemią. Członkowie rodziny dotknięci są zaznaczeni na czarno; mężczyźni i kobiety są oznaczone odpowiednio kwadratami i okręgami. Linia ukośna wskazuje, że osoba nie żyje. Liczby na czerwono wskazują osoby uwzględnione w mapowaniu Sekwencja ze znacznikami (STS). (B) Przeprowadzono analizę haplotypową opartą na tablicy SNK 10K, która wykazała wiązanie z regionem 14,3-cM między SNP rs717596 i rs252028 na krótkim ramieniu chromosomu 12. Ten region został potwierdzony i zawężony markerami STS do regionu 11,6-cM między markerami D12S1626 i D12S1623 zawierającym 31 genów, w tym KCNA1. (C) KCNA1 koduje bramkowany napięciem kanał potasowy Kv1.1. Analiza mutacji KCNA1 ujawniła heterozygotyczną mutację missense A763G u osobnika dotkniętego chorobą III-1, która powoduje substytucję aminokwasu N255D (podkreślono). (D) Analiza wielokrotnego dopasowania pokazuje konserwację aminokwasu N255 (czerwony pasek) wśród gatunków i członków rodziny Kv1. Zmutowane aminokwasy w innych rodzinach z genotypem Kv1.1 oznaczono ciemnoniebieskimi kropkami (17, 19, 21, 22). Niebieskie i czarne litery oznaczają odpowiednio konserwowane i niekonserwowane aminokwasy. (E) Schematyczne przedstawienie kanału Kv1.1, który składa się z czujnika napięcia w odcinku transbłonowym S4 i regionu formowania porów (S5 i S6). Lokalizacja nowo zidentyfikowanej mutacji N255D jest oznaczona czerwoną kropką, podczas gdy inne pobliskie mutacje są oznaczone ciemnoniebieskimi kropkami. Lokalizacja Kv1.1 w DCT nerki. Jak dotąd wykazano, że wszystkie białka związane z rodzinną hipomagnezemią ulegają ekspresji w nerkach, co podkreśla kluczową rolę tego narządu w homeostazie Mg2 + w organizmie. Aby zbadać (pod) komórkową lokalizację Kv1.1 w nerkach, wykorzystaliśmy królicze przeciwciało poliklonalne skierowane przeciwko kanałowi Kv1.1. Barwienie immunopozytywne obserwowano wzdłuż błon śluzowych różnych kanalików obecnych w powierzchniowej korze mysiej nerki (Figura 2). Używając seryjnych odcinków nerki, wykazaliśmy, że Kv1.1 kolokalizuje z nabłonkowym kanałem Mg2 + TRPM6 w DCT (Figura 2A). Aby potwierdzić tę lokalizację, przebarwiliśmy odcinki nerki dla Kv1.1 i kalbindyny D28K i stwierdziliśmy częściowe zachodzenie w ekspresji Kv1.1 i kalbindyny D28K (Figura 2B). Ten wzór można wytłumaczyć wcześniejszymi obserwacjami, że kalbindyna D28K jest wyrażana nie tylko w DCT, ale również w kanale łączącym (CNT) (16). Dlatego te dane potwierdzają, że Kv1.1 jest zlokalizowany głównie w DCT. Rzeczywiście, nie obserwowano różnicowania między Kv1.1 a akwaporyną-2 (AQP2), markerem dla CNT i kanału odbierającego (Figura 2C). Te odkrycia potwierdzają ograniczoną lokalizację Kv1.1 w segmencie DCT nerki transportującym Mg2 +. Rycina 2Immunohistochemiczna analiza Kv1.1 w nerkach. (A) Barwienie dla Kv1.1 (zielony) i TRPM6 (czerwony) mysich seryjnych odcinków nerki (prawe panele: przegląd obszaru korowego, lewe panele: powiększone obrazy kanalików immunopozytywnych). Gwiazdki wskazują te same dystalne kanaliki na sekcje seryjne intensywnie wybarwione dla Kv1.1 i TRPM6. (B) Skrawki nerki myszy były przebarwione dla Kv1.1 (zielony) i kalbindyny D28K (czerwony) (dolne panele: kanaliki immunopozytywne, górny panel: połączony kontrast różnicowy [DIC] image). (C) Kosztowanie Kv1.1 (zielony) i AQP2 (czerwony) w sekcjach mysiej nerki (dolne panele: kanaliki immunopozytywne, górny panel: połączony obraz DIC). G, kłębuszek; 28K, calbindin D28K. Skalowane pręty: 50 .m (A, lewe panele), 80 .m (A, prawe panele, C, dolne panele), 20 .m (B, górny panel), 40 .m (B, dolne panele; C, górny płyta). Kv1.1 N255D powoduje, że niefunkcjonalne kanały mają dominujący negatywny wpływ na funkcję kanału dzikiego. Aby określić wpływ mutacji Kv1.1 N255D na aktywność kanału, komórki HEK293 pozornie transfekowano lub przejściowo transfekowano Kv1.1 typu dzikiego i / lub Kv1.1 N255D. Stosując technikę patch-clamp na całej komórce, zmierzono prądy K + na zewnątrz przez dializowanie komórek roztworem pipety zawierającym 140 mM K +. Komórki eksprymujące kanały Kv1.1 typu dzikiego wytwarzały typowo opóźnione prądy prostujące, podczas gdy komórki HEK293 eksprymujące Kv1.1 N255Da wykazywały małe prądy podobne do tych z pozornych komórek eksprymujących plazmid (Figura 3, A i B).
[podobne: jak bezpiecznie spędzić wakacje, fit med salon, młody jęczmień green ways ]
[patrz też: odżywki na mase mięśniową, warta ubezpieczenie turystyczne, kotlety mielone bez jajka ]