Skip to content

Wpływ wdychanego tlenku azotu na regionalny przepływ krwi jest zgodny z wewnątrznaczyniowym dostarczaniem utlenionej azotowej ad

2 miesiące ago

58 words

Wolontariusze mieli normalne stężenie hemoglobiny i wszyscy byli w doskonałym zdrowiu ogólnym bez czynników ryzyka dla dysfunkcji śródbłonka (palenie tytoniu, stężenie cukru we krwi większe niż 120 mg / dl, cholesterol LDL większy niż 130 mg / dL, ciśnienie krwi większe niż 140/80 mmHg ). Pacjenci byli umieszczani na diecie o ograniczonej zawartości azotanów (<15 mg / dzień) przez 3 dni przed badaniem i na czczo, z wyjątkiem wody, po północy dnia badania i podczas badania (dieta opisana na www.nhlbi.nih.gov /labs/7east/lowNdiet.htm). Pomiary przepływu krwi przedramienia. Tętnicę ramienną i cewniki z żyły międzykomorowej umieszczono w ramieniu, z cewnikiem dotętniczym połączonym z przetwornikiem ciśnienia w celu pomiaru ciśnienia krwi i pompą infuzyjną dostarczającą 5% dekstrozy w wodzie przy 0,5 ml / min. Po 20 minutach odpoczynku uzyskano wyjściowe próbki krwi tętniczej i żylnej, a pomiary przepływu krwi przedramienia wykonano za pomocą pletyzmografii żylnej i okluzyjnej szczepu, jak podano wcześniej (8). Serię siedmiu pomiarów przepływu krwi uśredniono dla każdego oznaczenia przepływu krwi. Opór naczyniowy przedramienia został określony przez podzielenie średniego ciśnienia krwi przez wartości przepływu krwi przedramienia. Tętnicze L-NMMA przy 8. Mol / min następnie zastąpiono 5% dekstrozą w wodzie przy tej samej szybkości wlewu 0,5 ml / min. Dawkę tę wybrano z uwagi na poprzednią demonstrację, że efekty naczyniowe L-NMMA u ludzi są odtwarzalne w tej dawce, gdy napary są rozdzielane w czasie o około godzinę (11). Po 5 minutach dotętniczego L-NMMA uzyskano próbki krwi tętniczej i żylnej i zmierzono przepływ krwi w przedramieniu. Ćwiczenie przedramienia zostało następnie zainicjowane podczas ciągłego wlewu L-NMMA, za pomocą dynamometru z uchwytem ręcznym, z 1/3 uprzednio określonej maksymalnej siły uchwytu utrzymywanej przez 10 sekund, a następnie relaksacji przez 5 sekund, w powtarzających się cyklach. Po 5 minutach wysiłku uzyskano próbki krwi tętniczej i żylnej, a przepływ krwi przedramienia mierzono podczas dalszych ćwiczeń. Pięć procent dekstrozy w wodzie zastąpiło następnie infuzję L-NMMA w tętnicy ramiennej. Wdychany NO był następnie dostarczany przy 80 ppm przez maskę do znieczulania z workiem rezerwowym (INO Therapeutics Inc., Clinton, New Jersey, USA), z ciągłym monitorowaniem, aby zapewnić dostarczanie tlenu 21%, jak podano wcześniej (15, 21). . Po godzinie od wdychania NO, próbki tętnicze i żylne oraz pomiary przepływu krwi uzyskano jak opisano wcześniej dla pomiarów powietrza w pomieszczeniu. PH tętnicze i żylne, pO2 i pCO2 mierzono przy łóżku przy użyciu systemu i-STAT (i-STAT Corp., East Windsor, New Jersey, USA). Stężenie methemoglobiny. Stężenia methemoglobiny zmierzono metodą spektroskopii absorpcyjnej przy 700, 630, 576 i 560 nm, stosując związek Winterbourn (22). Preparat hemoglobiny i chemiluminescencyjne wykrywanie hemoglobiny nitrozilowej (hem) i S-nitrozhemoglobiny. Po zmierzeniu stężenia methemoglobiny, próbki granulowanej krwinek czerwonych poddano lizie w wodzie destylowanej z 0,5 mM EDTA (rozcieńczenie 1: 2) i 200 ul lizatu hemoglobiny dodano do 600 ul 0,2 M KCN / 0,2 M K3FeIII (CN ) 6 za pomocą 0,5 mM EDTA w PBS lub 600 ul PBS z 0,5 mM EDTA i inkubowano przez 35 minut. Traktowanie 100-krotnym nadmiarem molowym KCN i K3Fe (CN) 6 selektywnie usuwa NO z hemu, jednocześnie zachowując wiązanie S-nitrosothiol (15). Po 35-minutowej inkubacji 500 .l próbki hemoglobiny przepuszczono przez intensywnie przemyte (2-godzinne przemywanie przy użyciu 0,5 mM wody EDTA o czystości do HPLC, aby usunąć środki konserwujące kolumny), kolumnę Sephadex G25 o objętości 9,5 ml (17- 0852-02; Amersham Pharmacia, Uppsala, Szwecja) w celu usunięcia azotynów, małych tioli i KCN / K3FeIII (CN) 6. Stężenie hemoglobiny w odcieku Sephadex G25 mierzono przez konwersję do cyjanomethemoglobiny. Próbki hemoglobiny (200 ul) poddano reakcji z I3. zwolnić NO w celu wykrycia chemiluminescencyjnego (15). Metoda pomiaru azotynów i S-nitrozotioli w reakcji z I3. do uwolnienia gazu NO (21, 23) zastosowano do hemoglobiny, którą traktowano KCN i K3FeIII (CN) 6 i bez nich. W skrócie, 7 ml lodowatego kwasu octowego i 2 ml wody destylowanej zmieszano z 50 mg KI. Dodano kryształ I2, aby uzyskać stężenie wynoszące 6. 20 mM (23). Przez mieszaninę reakcyjną przepuszczono helu, następnie przez N NaOH, a następnie do analizatora Sievers Model 280 NO (15, 21). Całkowita ilość SNO-Hb plus hemoglobina nitrozylowa (hem) została określona przez bezpośrednie dodanie próbek hemoglobiny do I3. roztwór bez wstępnej obróbki KCN / K3FeIII (CN) 6. Sygnał tła tła od wody zebranej z przemytej kolumny G25 Sephadex odjęto od tego sygnału. SNO-Hb można określić przez wstępne próbki hemoglobiny po wstępnej obróbce za pomocą KCN / K3FeIII (CN) 6, która zachowuje SNO-Hb, ale usuwa NO z hemu (15), przed dodaniem do I3. rozwiązanie
[podobne: jęczmień green ways, fit med salon, atopowe zapalenie skory zdjecia ]
[hasła pokrewne: jęczmień green ways, kotlety mielone bez jajka, sennik pocałunek w policzek ]