Skip to content

Zmniejszona miażdżyca w CX3CR1 / myszy ujawniają rolę fraktalkiny w aterogenezie ad 5

1 miesiąc ago

738 words

Myszy nie mające apoE utrzymywano na diecie zachodniej przez 15 tygodni. Aorty piersiowe i brzuszne otwierano podłużnie, a komórki światła śródbłonka (n = 11 myszy), podłoże aorty (n = 8 myszy) i korzeń aorty (n = 14 myszy) izolowano jak opisano w Methods. Przeprowadzono PCR w czasie rzeczywistym w celu ilościowej oceny ekspresji mRNA FK, a wyniki wyrażono jako mRNA FK / a-GUS mRNA. Każdy punkt danych reprezentuje średnią z podwójnych pomiarów. Aby określić wpływ cytokin na ekspresję mRNA FK, analizowaliśmy wczesne pasma hodowli mysich aortalnych SMC i makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego. Jak pokazano na Figurze 3a, mRNA FK było łatwo wykrywane w hodowlach SMC i było znacznie podwyższone w wyniku połączenia IFN-y. i TNF-a, dwie cytokiny znane z obecności zmian miażdżycowych. Zgodnie z danymi pochodzącymi z bogatych w makrofagi korzeni aorty, w makrofagach pochodzących ze szpiku kostnego było bardzo mało mRNA FK, a to nie zostało wzmocnione przez dodanie IFN-y. i TNF-a (Figura 3b, uwaga na części 3a i 3b przedstawiają różne skale osi y). Rysunek 3D Określenie mRNA FK w SMC i makrofagach. Myszy bez apoE utrzymywano na normalnej diecie chow, a pierwotne SMC i hodowle makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego ustalono jak opisano w Methods. (a) SMC inkubowano przez 24 godziny z IFN-a (20 ng / ml), TNF-a (20 ng / ml) lub obie cytokiny i poziomy mRNA FK określano za pomocą ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym, jak opisano w legendzie do figury 2. (b) makrofagi pochodzące od szpiku kostnego (uwaga na zmianę skali osi y). Hodowle SMC ustalono z dwóch różnych myszy i użyto przed trzecim przejściem. Makrofagi pochodzące z szpiku kostnego pochodziły od trzech różnych dawców i były stosowane w dniu 8. Każdy punkt danych reprezentuje średnią z podwójnych pomiarów. Zauważyliśmy korelację między silną ekspresją FK na SMC a obecnością sąsiednich monocytów / makrofagów CDllb +, jak zilustrowano na Figurze 4. Określiliśmy ilościowo tę obserwację przez wybarwienie seryjnych przekrojów dla FK i CD11b i ocenę stopnia ekspresji FK sąsiadującego z każdym z nich. Komórka CD11b +. Jak pokazano w Tabeli 1, około 90% wszystkich komórek pozytywnych względem CDllb znajdowało się bezpośrednio w sąsiedztwie obszarów wybarwionych dla FK. Około 13% pól o wysokiej mocy zawierało obszary intensywnie zabarwione dla FK, jednak te pola zawierały 39% komórek CD11b + wykrytych we wszystkich polach o dużej mocy. Rycina 4. Nieumiejętne wybieranie zmian miażdżycowych w apoE. /. myszy. Myszy karmiono dietą wysokotłuszczową typu zachodniego przez 10 tygodni, a seryjne skrawki przecinano przez bliższą aortę i barwiono pod kątem FK (a), CDllb (b) lub za pomocą barwienia Movat w celu wizualizacji elastyny (c). Oryginalne powiększenie: × 200. Tabela 1: Połączenie komórek CD11b + z tworzeniem zmian miażdżycowych FK u myszy z niedoborem CX3CR1. Aby bezpośrednio ocenić znaczenie ekspresji FK w zmianach miażdżycowych, przeszliśmy apoE. /. myszy z niedoborem CX3CR1, receptora dla FK. CX3CR1. / ., apoE. /. i CX3CR1 + / +, apoE. /. myszy umieszczono na diecie wysokotłuszczowej zachodniej przez 5, 10 lub 15 tygodni. Nie było istotnych różnic w całkowitym cholesterolu lub trójglicerydach między dwiema grupami (tabela 2). Analiza myszy na diecie przez 10 tygodni nie wykazała różnic między genotypami w ich profilach lipoproteinowych, jak określono za pomocą FPLC (Figura 5). Bardzo podobne wyniki uzyskano dla myszy na diecie zachodniej przez 5 tygodni (dane nie pokazane). Figura 5 Analiza lipoprotein. Myszy utrzymywano na diecie wysokotłuszczowej typu zachodniego przez 10 tygodni. Osocze połączono, lipoproteiny frakcjonowano metodą FPLC, a zawartość cholesterolu w każdej frakcji określono w sposób opisany w Methods. Osocze od sześciu CX3CR1. /. i połączono sześć myszy CX3CR1 + / +. Tabela 2Całkowity cholesterol, triglicerydy i masy myszy na diecie zachodniej Rozmiar uszkodzenia określono ilościowo w aortach przypiętych i wybarwionych Sudanem IV. Wyniki tej analizy ujawniły znaczne zmniejszenie zasięgu aorty w CX3CR1. /. myszy w każdym z trzech punktów czasowych (Figura 6a). Po 10 tygodniach diety zachodniej, zmiany chorobowe pokrywały średnio 6,7% całkowitej aorty u myszy CX3CR1 + / +, w porównaniu z 3,4% w CX3CR1. /. myszy. Uszkodzenia myszy CX3CR1 + / + rosły równomiernie w czasie, podczas gdy postęp zmian w CX3CR1. /. myszy były znacznie osłabione. Po 15 tygodniach odżywiania 10,9% aorty u myszy typu dzikiego pokryły zmiany, w porównaniu z 6,9% w CX3CR1. /. myszy, co stanowi redukcję o 36% (P <0,002). Figura 6 Obszary zmian naczyniowo-miażdżycowych w CX3CR1 + / +, apoE A /. i CX3CR1. / ., apoE. /. myszy karmione zachodnią dietą przez 5, 10 lub 15 tygodni [hasła pokrewne: leczenie kanałowe białystok, przepisy w diecie dukana, poliploidalność ] [przypisy: glykopeel, poliploidalność, młody jęczmień green ways ]