Skip to content

Zmniejszona miażdżyca w CX3CR1 / myszy ujawniają rolę fraktalkiny w aterogenezie czesc 4

1 miesiąc ago

745 words

Aby oszacować miażdżycę tętnic wzdłuż całej aorty, wycięto drzewo aorty, oczyszczono z wszelkich tkanek tłuszczowych i tkanki łącznej przyczepionych do przydanki i analizowano, zasadniczo tak, jak opisali Véniant i in. (21). Pokrótce, myszy perfundowano przez kaniulę wprowadzoną do lewej komory za pomocą PBS, a następnie roztworu utrwalającego (10% formalina buforowana fosforanem, 7,5% sacharozy, 20. M butylowanego hydroksytoluenu i 200. M EDTA, pH 7,4). Aortę otwierano wzdłuż wzdłuż brzusznej linii środkowej od tętnic biodrowych do korzenia aorty. Po usunięciu naczyń rozgałęzionych aortę przyczepiono płasko na czarnej powierzchni wosku. Uszkodzenia barwiono Sudanem IV przez 15 minut, odbarwiono 80% etanolem przez 20 minut, a następnie przemyto i przechowywano w roztworze utrwalacza. W celu określenia zakresu zmian w aorcie z otworem otwartym, ilość barwienia Sudan IV określano ilościowo za pomocą progowania koloru w celu ograniczenia obszarów barwienia. Obrazy aorty zostały wykonane przy pomocy cyfrowego aparatu Polaroid (DMC1) zamontowanego na mikroskopie dyspersyjnym Leica MZ6 (Technical Instrument San Francisco, San Francisco, Kalifornia, USA) i analizowane za pomocą oprogramowania Adobe Photoshop 6 (Adobe Systems Inc., Mountain View, Kalifornia, USA) oraz wtyczki Image Processing Tool Kit (gry Reindeer Games, Gainesville, Floryda, USA). Trzy zdjęcia każdej aorty zostały przechwycone i podzielone na trzy regiony (łuk, klatkę piersiową i brzuch), z których określono powierzchnie i uszkodzenia. Dane są zgłaszane jako procent powierzchni aorty pokrytej zmianami (całkowita powierzchnia zmian miażdżycowych podzielona przez całkowitą powierzchnię aorty, obie w. M2). Do analizy zmian miażdżycowych w proksymalnym odcinku aorty ocenialiśmy osiem CX3CR1 + / +, apoE. /. myszy i osiem CX3CR1. / ., apoE. /. myszy po 10 tygodniach diety wysokotłuszczowej. Całkowita powierzchnia zmian aortalnych każdej z tych ośmiu myszy była w przybliżeniu równa średniej wszystkich CX3CR1 + / +, apoE A /. i CX3CR1. / ., apoE. /. myszy, odpowiednio w dziesięciotygodniowym punkcie czasowym. Serca poddawano perfuzji przez 30 minut roztworem utrwalającym (10% formalina buforowana fosforanem, 7,5% sacharoza, 20 .M butylowany hydroksytoluen i 200 .M EDTA, pH 7,4), a następnie równoważono przez co najmniej 4 godziny w 20% sacharozy. przed osadzeniem w optymalnych formach kriostatu mediów o temperaturze cięcia. Około 80 skrawków o grubości 10 urn przecięto przez proksymalną aortę, wyśrodkowaną na otworze lewej tętnicy wieńcowej. Co siódmą część barwiono czerwonym olejem O (0,5% w glikolu propylenowym) przez 4 godziny, a następnie wybarwiano kontrastowo hematoksyliną Mayera przez minutę. Zdjęcia zostały zrobione przy użyciu mikroskopu Nikon Eclipse 600 i aparatu cyfrowego SPOT-2 (Instrument techniczny San Francisco). Stopień miażdżycy zmierzono za pomocą progowania koloru w celu ograniczenia obszarów zabarwienia O na czerwono olejem, jak opisano powyżej, i przedstawiono jako średni obszar uszkodzeń w grupie sekcji. Wyniki Ekspresja FK w zmianach miażdżycowych. Najpierw staraliśmy się ustalić, czy FK ulegało ekspresji w zmianach miażdżycowych. Inkubowaliśmy odcinki aorty od apoE. /. myszy na diecie wysokotłuszczowej zachodniej przez 10 tygodni, z przeciwciałami skierowanymi przeciwko amino-końcowej części FK. FK można było łatwo wykryć w obszarach zmienionych chorobowo (rysunek 1a), ale nie w niejonowych obszarach aorty (dane nie przedstawione). Analiza seryjnych przekrojów wykazała, że ekspresja FK była najbardziej intensywna na SMC położonych bezpośrednio pod makrofagami i że same makrofagi były jedynie słabo dodatnie (Figura 1). Ekspresję FK odnotowano również na komórkach śródbłonka w obszarach zmienionych chorobowo (Figura 1, a i c) oraz w obszarach pozbawionych komórek (Figura 1d). Ryc. 1. Immunolokalizacja FK w zmianach miażdżycowych. Myszy pozbawione apoE (myszy apoE (3 /) utrzymywano na diecie zachodniej przez 10 tygodni. Serialne skrawki pocięto na poziomie płatków zastawki aortalnej i inkubowano z przeciwciałami. (a) Barwienie FK (wizualizowane jako czerwone). (b) Barwienie makrofagów (wizualizowane jako zielone). (c) Scalony obraz a i b. (d) Jądra barwiono DAPI (niebieski) i obraz wychwytywano za pomocą filtra wielopasmowego (DAPI / fikoerytryna / FITC). Oryginalne powiększenie: × 200. Następnie pobieraliśmy śródbłonek i ośrodek SMC z bliższej aorty apoE. /. myszy na wysokotłuszczowej diecie zachodniej przez 15 tygodni. Jak pokazano na rycinie 2, występowała obfita ekspresja mRNA FK zarówno w śródbłonku, jak i w ośrodkach aorty, ale nie w bogatych w makrofagi korzeniach tych myszy. Barwienie przeciwciałami specyficznymi dla komórek śródbłonka i SMC ujawniło, że te pierwotne hodowle były czyste w ponad 99% (danych nie pokazano). Rysunek 2 Określanie mRNA FK w pierwotnych tkankach naczyniowych
[podobne: leczenie kanałowe białystok, odżywki na mase mięśniową, fit med ]
[podobne: kotlety mielone bez jajka, sennik pocałunek w policzek, zapalenie woreczka łzowego ]